文档介绍：上皮细胞培养1):取外科植皮或手术残余皮肤小块,以角化层薄者为佳,早产流产儿皮肤更好,~1平方厘米小块。:%EDTA中室温置5分钟。:%胰蛋白酶中,置4℃过夜。:取出皮肤,用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。:取出表皮单独处理,用剪刀剪成更小的块后,%胰蛋白酶中,37℃再消化30~60分钟。,使成细胞悬液。:通过80目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸上清,直接加入Eagle液和20%小牛血清,制成细胞悬液,接种入碟皿中,CO2温箱培养。 2) 乳腺组织培养直接培养法:(适于培养含纤维少的软组织),用锋利刀片将组织反复切割成碎块。,再补加少许培养液,用吸管吹打片刻,置试管架3~5分钟。吸除上层液可排除非乳腺细胞部分。重复2~3次。,向沉降管中再补加培养液,用吸管稍吹打,使沉降物重悬。不待细胞团块下降立即通过3~4层无菌纱布滤入另管中。,接种入培养瓶中培养。 胶原酶消化法:(适于处理含纤维多的较硬组织)其过程与培养其它组织相同。 3) :取胃溃疡或胃癌手术切除胃标本远端非病变区粘膜少许。:用含庆大霉素(400微克/毫升)和二性霉素(2微克/毫升的Hanks)液漂洗后,用钝器剥离下粘膜,剪成1mm3大小。:在I型胶原酶和透明质酸酶中,于37℃中消化80分钟。:收集细胞悬液,800转/分离心后,Hanks液漂洗两次。:末次离心后加入含有1%~2%胎牛血清的完全培养基,接种入不同孔数的培养板中,接种量依不同实验目的而定。 4) 肝细胞培养初代组织块培养:取新鲜肝脏,先剥除被膜和血管等纤维成分,用刀或剪刀把肝脏剪成1mm3左右的小块,采用帖壁培养法。 初代消化法培养:~4立方毫米的小块,用不含钙镁的BSS液洗两次。:%%胶原酶(都用无钙镁BSS配置)中,4℃冷消化10~12小时后,通过250微米和64微米尼龙网或不锈钢纱网滤过。、BSS液洗1~2次、计数、接种培养。消化培养肝细胞的另一种方法是灌流法;肝脏灌流需用全肝,以较小动物如小鼠和大鼠为好。,取出肝脏,先用BSS洗除血污。,吸取消化液后,把注射器头轻轻插入肝管中,用线绳结扎牢固,以防消化液漏出,轻轻把消化液注入肝管系统,并不时轻揉压肝脏,以便消化液进入肝小叶中;消化液在肝内停留20~30分后,在吸出消化液的同时并轻揉压肝脏,以使肝细胞脱落和消化液吸出。,注入离心管中,低速离心分离,用RPMI1640培养基培养(较其它培养基为好),能获得较纯的肝上皮细胞和获较好的效果。 传代培养:待细胞生长连接成片后,用BSS洗一二次,加1:%%EDTA混合消化3~5分钟,待细胞回缩,便停止消化,弃掉消化液,用BSS洗一二次,注入营养液,吹打,制成细胞悬液,再接种培养。 5)。如不立即培养可以保存于4℃中,但不宜超过12小时。无菌剪取长1