文档介绍：酶联免疫试验的质量控制要点
(宜城市人民医院湖北宜城441400)
中图分类号::A文章编号:1004-4949(2013)05-0156-01 综述医学美学美容Medical Aesthetics and Cosmetology2013年5月第5期 Aesthetics and Cosmetology综述酶联免疫试验因为灵敏度高、特异性好、经济安全等优点而在临床免疫实验室广泛应用,但由于操作步骤繁多,包括样本的收集、试剂的准备、加样、温育、洗涤、显色、比色、结果判定等,一个环节的操作不当,都会对检测结果产生影响,因此有必要加强酶联免疫试验的质量控制。现结合实际工作经验,总结如下供同行们在实际工作中参考。
1试验前的质量控制
采用血清或血浆标本,血浆标本可以使用常规量的肝素、枸橼酸纳或者EDTA抗凝,样本不能用叠氮钠防腐,以免抑制酶的活性;标本应新鲜,对于当天不能处理的标本,应放置2-8℃的冰箱保存,但不能超过五天,标在在低温下保存时间过长,IgG可聚合成多聚体,显色时会导致本底加深,影响结果的判断,若标本需长期保存需-15至-20℃冻存,冻存的标本避免反复冻融;血清标本应避免溶血和细菌污染,以防止过氧化物酶样物质造成的假阳性。
优质的试剂是保证检验质量的基础,对于不同厂家的试剂,应选择特异性强、灵敏度高、稳定性好、精密度cv<15%的试剂;试剂盒从4℃的冰箱取出,平衡至室温18-25℃后启用,微孔板开封后,余下的微孔即时用自封袋封存,并放入干燥剂,以避免受潮,在封存时应注意不要把封板膜粘到微孔底部,以免在比色时影响其透光性;不能使用过效期试剂盒,不同厂家、品名、批号的试剂不可混用,以免产生错误的结果。
2试验中的质量控制
酶联免疫试验中,一般需要多次加样,有些试剂配带滴嘴,可直接使用滴加试剂,但其准确度受个人力度和加样姿势影响较大,建议使用加液器加液,常用的加液器必须定期进行维护和校准,保证其精密度;在加试剂前应先把试剂瓶翻转数次,使液体充分混匀;不同的标本和试剂需更换吸嘴,加液时注意勿使加液吸嘴头接触孔内液体,避免标本,试剂的污染;加标本和试剂时应尽量加在孔底,避免加样时在孔中产生气泡;日常工作中无论标本量的多少,每板反应板都应加阴、阳对照各两孔。
孵育温度要保持在37±1℃,温度过高或过低会影响检测结果准确性,保温容器最好是水浴箱,其可使温度迅速平衡,各反应板在水浴箱不应叠放在一起;为避免蒸发和污染,各反应板应用封板膜覆盖孔口,封板膜不能重复使用,易导致污染;在孵育过程中避免阳光直射和接触次***酸等强氧化物质。
洗涤的目的是洗去反应液中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质,它是决定实验成败的关键,在酶联免疫试验反应的过程中应尽量避免非特异性的吸附,而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物洗涤下来;洗涤液配制后应充分摇匀,如有晶体应充分溶解;实验室一般都是用洗板机,洗板机洗涤时要注意洗涤液的加入量,各孔均须