PCR技术(硕士生课程).ppt

文档介绍：PCR技术简介分子生物学技术的迅速发展,为PCR技术的发现提供了坚实的基础,同时也为这一技术的发展和应用提供了宽广的舞台。PCR技术的发明1985年Mullis青年遗传学领域1995年诺贝尔化学奖灵感PCR技术的发明1971年Korana最早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA变性、与合适的引物杂交、用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。PCR原理示意图PCR的扩增效率:循环数. 扩增子数(靶序列拷贝数)1 22 43 84 165 326 6420 1,048,576301,073,741,824(10亿)3、PCR条件的优化模板引物(-1umol/L)缓冲液(Tris-HCl10mmol/LKCl50mmol/-)镁离子(-)dNTP耐热DNA聚合酶温度循环参数PCR的改进与完善Mullis最初使用DNA聚合酶I的Klenow片段不耐高温37°C下反应PCR技术的改进与完善1984年Keohanog改用T4DNA聚合酶1988年Saiki等从温泉中分离的一株嗜热杆菌(thermusaquaticus)中提取到一种耐热DNA聚合酶TaqDNA聚合酶耐热性忠实性扩增长度平台期