第九章 细胞培养.ppt

文档介绍：
细胞悬浮培养

单细胞的分离

单细胞培养
主要内容
植物细胞培养是指对植物器官或愈伤组织上分离出的单细胞(或小细胞团)进行培养,形成单细胞无性系或再生植株的技术。
单细胞的分离
◆单细胞的分离方法:
(1)机械法:分离叶肉细胞是先把叶片轻轻研碎再通过过滤和离心氧化细胞。
优点:
。
,有利于进行生理和生化研究缺点:容易伤害细胞结构。
(2)酶解法:利用果胶酶、纤维素酶处
理,分离出具有代谢活性的细胞,该法
不仅能降解中胶层,而且还能软化细胞
壁。因此,必须对细胞给予渗透压保护。
◆从愈伤组织分离单细胞
表面消毒的器室上切取组织—(接种)渗透培养基上—产生愈伤组织——剥下—(反复继代)—愈伤组织的松散性(不同的培养基可以使愈伤组织具有不同的生长速度,结构可松散性)—单细胞(或很小的细胞团)。
首先形成愈伤组织,将未分化和易粉碎的愈伤组织转移到盛有液体培养基(愈伤组织放在较高盐分,高生长素及高水解酪蛋白的培养基上培养,然后移入液体培养基中并搅拌而分散成单细胞)的容器中,置于摇床上不断振荡。通过振荡对细胞团施以一种缓和的压力,使它们破坏成小细胞团和单细胞,保持均匀分布在培养基中。有利促进培养基和容器内空气之间的气体交换。
◆植物单细胞培养的意义
1、建立单细胞无性系
2、采用生物化学的方法,对培养的单细胞进行人工诱发突变
3、排除体细胞干扰
4、遗传转化受体的建立
细胞悬浮培养
◆概念:用液体培养基对保持良好的分散状态的单个细胞或小的细胞聚集体于摇床上进行培养的方法,称为cell suspension culture。