文档介绍：反相高效液相色谱法测定牛黄上清胶囊中胆红素的含量
【摘要】目的为牛黄上清胶囊中胆红素含量的测定建立起反相高效液相色谱的测定方法。方法固定相:Hypersil BDS C18柱( ×250mm,5μm);流动相:二***亚砜-乙***(:);检测波长:450nm;流速: ml?min-1。-40μg/ml 之间呈现良好的线性关系(r=);胆红素的平均回收率(n=6)%(RSD=%)。结论该测定方法专属性强,准确、有效,可作为市售牛黄上清胶囊质量控制的方法之一。
【关键词】RP-HPLC;牛黄上清胶囊;胆红素含量
牛黄上清丸是中医治疗湿热证的经典方剂之一,首载于明代李梃的《医学入门》,具有清热泻火、散风止痛之功效。可用于热毒内盛、风火上攻所致的头痛眩晕、咽喉肿痛、目赤耳鸣、口舌生疮等症[1]。
根据90版的《中国药典》所载牛黄上清丸剂,经改造所成的一个中药新药制剂――牛黄上清胶囊。其处方由牛黄、菊花等19味常用的中药材所组成,处方中的君药为人工牛黄,其主要有效成分主要为胆红素[2-3]。现在,对胆红素的含量测定方法主要有:紫外分光光度法、RP-HPLC和HPLC等。本研究对牛黄上清胶囊中所含的胆红素进行了含量测定,运用的方法为反相高效液相色谱法,以期为牛黄上清胶囊提供反相高效液相色谱法的质量控制标准。
1仪器与试药
:Agilent1200泵。色谱柱:Hypersil BDS C18。
(市售);胆红素(批号:10077-200503,中国药品生物制品检定所提供);研究中所用的水为超纯水,乙***为色谱纯,各试剂均为分析纯。
2方法与结果
BDS C18柱( ×250mm,5μm);流动相为:二***亚砜-乙***(:)溶液;流速为: ml?min-1;检测波长为:450nm。
,精密称取,置于100ml棕色量瓶中,加入二***亚砜-乙***(7:3)溶液使其完全溶解,并将其稀释至刻度,摇匀后,制备成每1ml溶液含有胆红素40μg,即得。
,置于25ml的棕色量瓶中,加入二***亚砜-乙***(:)溶液20ml,精密称定其重量,经超声处理10min后放冷,再次称定重量,用二***亚砜-乙***(:)溶液补足其失重,摇匀后过滤,取滤液备用,即为供试品溶液。
,制备方法参照供试品溶液方法来制备阴性样品溶液。
,,,,,分别置于25ml棕色量瓶中,加入二***亚砜-乙***(:)溶液稀释至刻度,摇匀后,即可获得6个浓度的对照品溶液。各浓度分别精密吸取10μl的溶液注入高效液相色谱仪中,依据正文中所述的条件测定峰面积,其中纵坐标表示峰面积积分值(A),横坐标表示进样浓度(C),做出标准曲线,其回归方程为A=6436422