文档介绍：HPLC概述
第四章高效液相色谱分析
HPLC仪器与流程
HPLC的分离方法各论
HPLC的流动相与固定相
1. 高效液相色谱与经典液相色谱方法的比较
高效:填充物颗粒极细且规则,固定相涂渍均匀、传质阻力小,因而柱效很高。可以在数分钟内完成数百种物质的分离。
高灵敏度:检测器灵敏度极高:UV——10-9g, 荧光检测器——10-11g。
高速:HPLC采用高压输液设备,流速大增加,分析速度极快,只需数分钟;而经典方法靠重力加料,完成一次分析需时数小时。
高压:压力达150-300kg/cm2
高速:分析速度与GC相当
高效:柱效高,N=10000
高灵敏度: 10–9 ~ 10-11 g/ml
操作方便
应用范围广
HPLC特点
2. HPLC与GC的比较
分析对象及范围:GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物,而这些物质只点有机物总数的20%;HPLC可以分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物,这类物质占有机物总数的80%。
流动相的选择:GC采用的流动相中为有限的几种“惰性”气体,只起运载作用,对组分作用小;HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合,可供选择的机会多。它除了起运载作用外,还可与组分作用,并与固定相对组分的作用产生竞争,即流动相对分离的贡献很大,可通过溶剂来控制和改进分离。
操作温度:GC需高温;HPLC通常在室温下进行。
结论:从色谱分析的发展来看,HPLC比GC更为有用、更具发展前途!
3. 应用
由于HPLC分离分析的高灵敏度、定量的准确性、适于非挥发性和热不稳定组分的分析,因此,在工业、科学研究,尤其是在生物学和医学等方面应用极为广泛。如氨基酸、蛋白质、核酸、烃、碳水化合物、药品、多糖、高聚物、农药、抗生素、胆固醇、金属有机物等分析,大多是通过HPLC来完成的。
下图是各种HPLC方法的应用范围及对象
极性增加
不溶于水
溶于水
非极性
离子
非离子极性
吸附
反向分配
分配
正向分配
离子交换
尺寸排阻
凝胶渗透
凝胶过滤
分
子
量
high performance liquid chromatograph
液相色谱仪 1
液相色谱仪(2)