文档介绍：实验六:卫生细菌的检验—大肠菌群的测定
一、实验目的与要求:
学习并掌握水体中大肠菌群的检验方法、检验的原理、检验的依据、数据处理和报告方法。
强化水体大肠菌群检验的卫生意义知识。
二、实验原理
大肠菌群系指一群在37℃,24小时能发酵乳糖、产酸、产气,需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌中大肠菌群数是以每100毫升(克)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
三、仪器及材料
1、乳糖蛋白胨培养液
A 蛋白胨 10g
B 牛肉膏 3g
C 乳糖 5g
D 氯化钠 5g
E 溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L) 1mL
F 蒸馏水 1000mL
将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中,~,再加入1mL溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L),充分混匀,分装于装有倒管的试管中,115℃高压灭菌20min,储存于冷暗处备用。
2、二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液
按上述乳糖蛋白胨培养液除蒸馏水外,其它成份量加倍。
3、伊红美蓝培养基
A 蛋白胨 10g
B 乳糖 3g
C 磷酸氢二钾 5g
D 琼脂 5g
E 蒸馏水 1000mL
F 伊红水溶液(20g/L) 20mL
G 美蓝水溶液(5g/L) 13mL
:将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,,加入乳糖,混匀后分装,以115℃
高压灭菌20min。临用时加热熔化琼脂,冷至50~55℃,加入伊红和美蓝溶液,混匀,倾注平皿。
4、革兰氏染色液
A. 成份
a结晶紫 1g
b乙醇[ p (C2H2OH)]=95% 20mL
c草酸铵水溶液(10g/L) 80mL
B制法:将结晶紫溶于乙醇[ p (C2H2OH)]=95%中,然后与草酸铵溶液混合。
注:结晶紫不可用龙胆紫代替,前者是纯品,后者不是单一成份,易出现假阳性。结晶紫溶液放置过久会产生沉淀,不能再用。
A成份
碘片 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300mL
B制法:将碘和碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水。
:乙醇[ p (C2H2OH)]=95%。
A成份
a沙黄
b乙醇[ p (C2H2OH)]=95% 10mL
c蒸馏水 90mL
B制法:将沙黄溶解于乙醇中,待完全溶解后加入蒸馏水。
注:如沙黄买不到,可用苯酚复红染色液(1+10),作复染液,复染时间为10s。
仪器设备
1培养箱:36±1℃
2冰箱:0~4℃
3天平
4显微镜
5平皿:直径为9cm
6试管
7分度吸管:1mL,10mL
8锥形瓶
9小倒管
10载玻片
四、实验内容
1、检验生活饮用水时,取10mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白胨培养液中,取1mL水样接种到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中,另取1mL水样注入到9mL灭菌生理盐水中,混匀后吸取1mL()注入到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中,每一稀释度共接种