文档介绍：红颜草莓离体培养技术初探
摘要: 本文以红颜草莓叶片和匍匐茎为外植体,进行无毒苗离体培养,通过不同灭菌和诱导处理,得出组织培养方法诱导草莓植株再生的适宜方案。结果表明,幼嫩叶片和匍匐茎分别采用75%酒精浸泡20 s和 30 s后用无菌水漂洗3遍,%升***消毒5min后用无菌水漂洗5遍后再用滤纸迅速吸干接种,获得无菌株成功率达90%以上;叶片诱导分化适宜培养基为6 - BA mg/L + IBA mg/L + GA3 mg/L;匍匐茎尖诱导分化适宜培养基为6 - BA + IBA1 mg/L。
.jyqk和幼嫩的叶片,分别用1%洗洁精水溶液浸泡5 min,并用玻璃棒轻微搅动后,再用自来水冲洗30 min,无菌水冲洗1遍后移入超净工作台。根据表1对不同外植体进行灭菌处理,将匍匐茎尖和叶片分别放入灭菌烧杯中。倒入75%酒精分别浸泡20 s、30 s,无菌水冲洗3次,%升***溶液轻微搅动4 min、5 min、8 min,用无菌水冲洗5次,用滤纸迅速吸干水分。各处理分别接种50个外植体,10 d后统计外植体数量,并对外植体损伤情况进行统计。
诱导分化培养
叶片离体再生
将消毒后的叶片切成5 mm左右小块作为外植体,诱导培养基MS为基础培养基,附加不同植物生长调节剂浓度配比(见表2)。
每瓶放置1片外植体,放置于恒温培养室,在22 ~ 25°C,光照2 000 - 3 000 Lx,光照时间16 h条件下进行培养,2周后叶片周围出现愈伤组织,30 d后有绿色芽点。
匍匐茎尖诱导分化
在超净工作台上,40倍显微镜下,剥取匍匐茎尖(带1 ~ 2个叶原基)。按照表3对匍匐茎尖诱导分化处理,每瓶接种1个茎尖外植体,接种好后放置于恒温培养室,在温度22 ~ 25 °C,光照2 000 ~ 3 000 Lx,光照时间16 h条件下进行培养,仔细观察生长情况发现,在1周后绿点慢慢长大,4周后出现丛生芽点。
2 结果与分析
不同外植体灭菌结果
草莓的幼嫩叶片和匍匐茎都能诱导分化,从表4可以看出,叶片采用A2处理时外植体灭菌效果好,损伤程度低。匍匐茎采用A5外植体灭菌效果好,损伤程度低。即:叶片采用75%酒精浸泡20 s,用无菌水漂洗3遍,%升***消毒5 min后用无菌水漂洗5遍处理效果较好; 匍匐茎采用75%酒精浸泡30 s,用无菌水漂洗3遍,%升***消毒5 min后用无菌水漂洗5遍的处理效果较好。
不同外植体诱导分化结果
从表5可以看出,B1 、B2、 B3丛生的芽点少,诱导率低于50%,而叶片诱导分化B4芽点多,长势良好, B6芽点也多,但B6出现幼苗有轻度的玻璃化,因此,以B4最好。
从表6可以看出,C1、C2的诱导率偏低,C4、C5、C6的诱导率低于90%,C3匍匐茎诱导分化大于90%,芽点状态较好,因此,以C3处理诱导分化效果较好。
3 小结
(1)本文研究表明,叶片采用75%酒精浸泡20 s,用无菌水漂洗3遍,%升***消毒5 min后用无菌水漂洗5遍后用滤纸迅速吸干接种,成功率达到90%以上,