文档介绍：氯霉素眼药水的高效液相色谱分析
彭花萍
E-mail:phpfjmu@
仪器分析实验
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目的要求:
1、了解高效液相色谱的基本原理
2、了解高效液相色谱仪的结构及正确使用
3、学习外标法测定组分的含量
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色谱起源
石油醚
碳酸钙颗粒
色素混合物
色谱
分离组分
色谱的发明人
俄国科学家:M. S. Tswett
提出经典液相色谱
植物的石油醚提取液在碳酸钙吸附剂填充的玻璃管中分离出叶绿素及其他色素
流动相:携带样品流过整个系统的流体
固定相:静止不动的一相,色谱柱
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色谱法分离的基本原理:
各组分性质结构差异
与固定相相互作用差异
随流动相移动的速度不等
反复多次分配平衡(吸附—解吸)
保留时间不同
达到分离效果
A+B+C
A
B
C
C
B
A
C
B
A
C
C
B
色谱洗脱过程与色谱图
t,min
A
B
C
信号
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色谱法:利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术
色谱定义
色谱是一种分离技术.
色谱的主要目的是对混合物中的目标物分离和定量
色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图,其纵坐标为信号强度,横坐标为保留时间。
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保留体积VR
调整保留体积V'R
死体积V0
峰面积
相对保留值
保留指数
V=;Fc为流动相流速
保留值
区域宽度
W1/2=
W=4σ
W1/2
W
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液相色谱
按流动相与固定相的分子聚集状态分类
流动相
固定相
气体(gas,G)
液体(liguid,L)
超临界流体(supercrttical fluid,SF)
固体(solid,S)
GSC
LSC
SFSC
液体(liguid,L)
GLC
LLC
SFLC
化学键合相(bonded phase,BP)
GBPC
LBPC
SFBPC
气相色谱
液相色谱
超临界色谱
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液相色谱:以液体作为流动相的色谱分离方法
适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析
流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用
HPLC
是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段:
高精度、耐高压的输液泵
高性能的色谱柱
高灵敏度的检测器
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HPLC特点
分离性能好
灵敏度高(10-9~10-12 g)
选择性高(同分异构,旋光异构)
分析速度快
进样量小(1-100 mL)
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HPLC应用领域
药物分析(抗生素、维生素)
临床分析(药物代谢)
化学品(邻苯二甲酸、醛、酮、药物中间体)
环境(多环芳烃、农残、微嚢藻毒素)
食品(孔雀石绿、苏丹红)
生命科学(蛋白质、多肽)
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