文档介绍：总蛋白标准(新旧)准确度验证实验
一实验目的:通过加样回收率计算,分别以旧标准和新标准为参照,拟定标准曲线,再分别以新标准1mg/ml和旧标准1mg/ml稀释成未知浓度两个低浓度,一个中浓度,一个高浓度样品,(稀释时我们其实是按照标准操作稀释的,、5ug/ml,,15ug/ml,在这次实验中我们当做未知浓度样品来检测),通过加入准确浓度的蛋白标准,进行回收率实验,相互验证新旧标准拟定标准曲线,检测蛋白浓度测定结果与真实值接近的程度。
二实验步骤:1 旧标准为参照,拟定标准曲线如下:
标准加入量
OD1
OD2
均值
5
10
15
2样品的制备:取含量为1mg/ml新标准,分别取25ul,50ul,75ul,150ul,稀释至1ml,分别标记为未知浓度待测样品1、2、3、4,按照考马斯亮蓝测定方法,每个标号样品平行测定两次,结果如下:(计算过程略)
名称
浓度(ug/ml)
OD值均值
1
OD值小于标准低限
2
3
4
3加样回收率实验:
分别取新标准蛋白样品1、2、3、,并标号为ABCD,分别加入准确浓度的旧蛋白标准溶液5ug/ml,,10ug/ml,,每个标号样品平行测定三次,结果如下:(计算过程略)
名称
测的总量
ug/ml
样品含量
()
加入量
ug/ml
回收率
OD值均值
A
OD值小于曲线标准低限
B
%
C
%
D
%
备注:回收率计算公式为(测得总量-样品含量)/加入量*100%,通常要求95%-105%.
4新标准为参照,拟定标准曲线如下:
标准加入量
OD1
OD2
均值
5
10
15
5样品的制备:取含量为1mg/ml旧标准,分别取25ul,50ul,75ul,150ul,稀释至1ml,分别标记为待测样品abcd,按照考马斯亮蓝测定方法,每个标号样品平行测定两次,结果如下:(计算过程略)
名称
浓度(ug/ml)