文档介绍：考试6
、γ射线的杀菌机理是什么?
?
?
?其最佳杀菌浓度是多少?
?
?有哪些具体方法?

浊——细菌悬浮液的浊度
细菌不完全透光,一定范围内菌溶液的混浊度与菌数量成正比
(1)制标准曲线(OD~No)
(2)测菌液浊度,查图表得出细菌数量
浊度仪或721分光光度仪
(二)间接计数法(活菌计数法)
提问:前述方法中计数的不都是活菌,如何分辨菌死活?
繁殖
提问:细菌繁殖的可见现象是什么?
产生菌落(固体培养基培养)、菌液混浊(液体培养基培养)
计数原理:一个细菌可繁殖成一个菌落或一群细菌.
缺点:慢
分固体培养法和液体培养法
无菌水
1. 稀释平板计数法—固体培养法
第一步:菌样巧妙稀释
得到不同稀释度(10-x)菌液
菌样被无菌水不同稀释倍率后平板培养图
10
-
2
10
-3
10
-4
10
-5
各取1ml,均匀涂布于冷固体培养基平板上或与温热液态固体培养基混合冷却。
第三步:培养
稀释度过低,菌落密集无法计数
可以计数,但数量过多,费时费力
数量合适,统计计算,作为结果
数量太少,误差因素太大,不做计数
第二步:接种平板
每一个细菌会生成一个菌落
一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为宜。
第四步: 计数
细菌数量=?
细菌数量=数出的菌落数/稀释度
例如:10-5稀释度时菌落数为125个
细菌数量=125/10-5=×107个/mL
平板计数法是采用最广的一种活菌计数法
如国标法水中细菌总数的测定。
注意:作空白及取平行样(2~3组)均值减小误差
平均

特点:液体培养、统计学查表计数
又称MPN法(或最可能数法)
Most Probable Number
例如测定SRB(硫酸盐还原菌,厌氧)的数量
提问:能用稀释平板法计数吗?为什么?
一般不能,厌氧菌暴露在空气中不能生长(除非厌氧培养箱)
对这类菌可以利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征进行深层隔氧液体培养,按MPN法进行计数。
3
3 2 0
10
-4
10
-5
10
-6
3
10
-
10
-
2
10
-3
10
-4
10
-5
(1)稀释
(2)稀释接种样品
在液体表面加一层无菌液体石蜡隔绝氧气,
恒温37℃培养14天
记录变黑的试管情况
(3)培养
1ml
+
9ml
培养基
提问:为什么有些试管变黑有些没有?
稀释程度、取样概率
(4)统计-查表-计算
根据不同稀释度变黑试管
①统计出数量指标
三位数及其中最低稀释度
(取变黑的管数最多、稀释度又最低的生长管数,为第一位数字,后面两个稀释度的生长管数后两位数)
提问:上例情况而言统计数量是几?
②查表
表——MPN表
320 10-4