文档介绍：实验通知
———每班以三人为单位分成小组,其中两男一女;并从一班到三班依次每7小组为一大组,分为五大组(下周一交名单)
———(周六)、(周日)、
上午7:30 下午2:00开始
———;
———写试验预习报告,试验前检查(没有不得试验),并提问(回答情况同样作为成绩记录);
?
2. 细菌的代时G为哪个时期的?如何测算?
?
?如何测稀释率(D)?
“洗脱”现象?
?如何进行特殊细菌筛选?
考试 8
(2)细菌的驯化
①渐变-诱导法(休眠的酶基因复活+自然突变)
方法:
待降解物通常为有机毒物或惰性物。
5
6
7
N
选择性培养基(待降解物,如石油)浓度升高
5
n
大一→大四
N+1
死
筛选与诱导驯化可以同时进行
特点:操作简便,驯化的潜力有限,慢。
结果
诱变剂:温度、紫外线、核辐射、酸、碱、化学诱变剂等等。
②突变—诱变法
提问:哪些因素可以引起基因突变呢?
提问: 基因突变的分子机制?
DNA碱基丢失、增多、错配等
点突变→染色体畸变
基因突变有这样几个特点。

发生Ⅰ.随机性结果Ⅱ.无定向性
基因突变在哪一个细菌中发生是随机的,突变基因的部位也是随机的。突变的发生没有固定的方向。
频率Ⅲ.稀有性可Ⅳ.诱变性
突变率(每一细菌在每一世代中发生某一性状突变的机率)通常为10-5~10-10。十万至一百亿个细菌中才可能有一个细菌的基因发生突变。
人工诱变可提高10~105倍
Ⅵ.可逆性
修复成功
Ⅴ.稳定性
修复失败
产生的变异性状是稳定的、可遗传的。
利用基因突变的特点,可以通过人工诱变进行细菌的基因改造。
常用的诱变剂:紫外线、5—溴尿嘧啶、亚硝酸、卟啶染料等。
诱变的步骤
Ⅰ.制出发菌株的单细菌悬浮液
提问:为什么?如何在整个过程中尽量使细菌分散呢?
诱变剂与细菌充分接触;向细菌培养液中加入玻璃珠,并保持在诱变过程中始终进行振荡搅拌形成出发细菌的单细菌悬浮液;

Ⅱ.选择合适的诱变剂剂量进行诱变
提问:为什么要有剂量限制呢?
少,效率低;过高“是药三分毒”会造成细菌大量死亡。
例如在进行细菌紫外诱变时,通常使用15或20W的紫外灯距离细菌单细菌悬浮液15~30cm,照射15~20min。
Ⅲ.筛选突变出的高效菌
提问:如何筛?
选择性培养基
评价
诱变法潜力要远大于诱导法,但操作复杂。在实际诱变中,往往要经过几次不同诱变方法的诱变处理以及大量繁琐的筛选分离工作才有可能获得理想的突变体。最后这些突变体将会在实验室小试、中试的基础上被投放到生产实践中。
参见《环境微生物学技术手册》(图书馆X172-6201)
通常生产上更多利用的是诱导法。
污泥培养初期逐步提高污水比例,有些菌种不能适应被淘汰(筛选),能产生诱导酶的菌株及自发突变体中能来降解此类废水的菌种能够生存而被保留下来,且能力逐步提高,使废水达到预期的排放标准;
*诱变菌株环保市场的开发前景如何?目前国内外有哪些主要的此类公司?