文档介绍：实验九酶联免疫吸附试验-ELISA 实验十 IgG的分离和纯化
程燕
2014年6月9日
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实验九酶联免疫吸附试 ( Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)
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实验目的
、种类和用途。
(HBsAg)的方法。
。
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实验原理
用酶来标记抗原或抗体的免疫分析分析技术。由于酶的高效生物催化作用,产生了放大作用,使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来,这种技术被称为酶联免疫吸附试验法。
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实验原理
将已知抗体(或抗原)结合在某种固相载体上,并保持其免疫活性。
测定时将待检标本和酶标抗体(或酶标抗原)按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体(或抗原)发生反应,用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离物成分,然后加入底物显色,进行定性或定量测定。
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实验原理
ELISA的基本原理有三条: 
(1)抗原或抗体能以物理性(疏水性)地吸附于固相载体表面,并保持其免疫学活性;
(2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;
(3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。
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实验原理
常用酶联免疫吸附试验有
间接法
竞争法
双抗体夹心法
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ELISA-间接法
此法是检测抗体最常用的方法。将已知抗原吸附于固相载体上,加入待测血清(抗体)与之结合,洗涤后,加酶标抗体和底物进行测定。其原理见图。
酶标抗体
固相抗原
待测抗体
E
E
E
ELISA间接法示意图
底物
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用于抗原及半抗原的定量测定,也可用于测定抗体。
以测定抗原为例,将特异性抗体吸附于固相载体上,加入待测抗原和一定量的已知酶标抗原,使二者竞争地与固相抗体结合,经过洗涤分离,最后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。
固相抗体
E
E
E
酶标抗原待测抗原
E
底物
E
显色反应(弱)
固相抗体
E
E
E
酶标抗原
底物
显色反应(强)
E
E
E
E
E
E
ELISA-竞争法
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ELISA-双抗体夹心法
双抗体夹心法常用于检测抗原。
将已知抗体吸附于固相载体,加入待测标本(含相应抗原)与之结合,温育后洗涤,加入酶标抗体及底物溶液进行测定。
酶标抗体
固相抗体
待测抗原
E
E
E
双抗体夹心法检测抗原
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