实验二 GSTZ基因的PCR扩增.ppt

文档介绍：实验二 GSTZ基因的PCR扩增Amplifying GSTZ gene by Polymerase Chain Reaction
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核酸的体外扩增
真核细胞内DNA的复制
聚合酶链反应( Polymerase Chain Reaction,PCR)
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The Nobel Prize in Chemistry 1993
"for contributions to the developments of methods
within DNA-based chemistry"
"for his invention of the polymerase chain reaction (PCR) method"
Kary B. Mullis
La Jolla, CA, USA
B:1944
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一、PCR的基本原理:
一种模拟天然DNA复制的体外扩增法
PCR反应三部曲:
变性(denature): 加热使双链DNA解开螺旋
↓
退火(annealing) 在退火温度条件下引物同模板杂交
↓
延伸(extend) 在Taq DNA聚合酶,dNTPs,Mg2+
和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物
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PCR反应体系
DNA模板 template
引物 primers
dNTPs
耐热聚合酶 Taq DNA polymerase
反应缓冲液 reaction buffer
MgCl2
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试剂原液浓度 工作浓度 50l体系
PCR缓冲液 10 1 5L
上游引物 10mol/L mol/L L
下游引物 10mol/L mol/L L
dNTPs 200mol/L 4L
MgCl2 25mmol/L 3L
DNA模板 ~10ng
ddH2O L
Taq酶 1U/L L体系 2. 5L
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PCR PARAMETER
Pre-denature: 94℃ 5min
PCR Cycles:
Denature 94 ℃ 40sec
Annealing 58 ℃ 35sec
Extend 72 ℃ 1min30sec
Totally 35~40 cycles
Post-extend: 72 ℃ 7min
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PCR反应体系
DNA模板 template
引物 primers
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耐热聚合酶 Taq DNA polymerase
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MgCl2
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PCR反应体系
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引物 primers
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耐热聚合酶 Taq DNA polymerase
反应缓冲液 reaction buffer
MgCl2
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