文档介绍：XXX人民医院检验科微生物室
标准操作文件
文件编号:WSW-SOP-007
版本号:2007 第1次修改
编写者:XXX XXX
审核者:XXX
修订日期:2012年1月15日
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呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程
规范呼吸道标本细菌学检验标准操作规程,确保检验结果准确可靠。
呼吸道标本培养和涂片检查。
标本类型痰、咽拭、支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子、肺穿刺等。
标本采集
采集时间以晨痰为好;支气管扩张症病人,清晨起床后进行体位引流,可采集大量痰标本。
自然咳痰法在留取痰之前,用清水反复漱口,应从气管深部咳出痰,吐人无菌容
气管镜下采集法在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。
3 气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液,收集标本,适用于厌氧菌培养。
棉拭采集法用无菌棉拭子轻轻擦拭病人鼻咽部黏膜,留取标本,置无菌试管内送检。
标本拒收标准
申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。
痰标本呈水样或唾液样。
痰涂片白细胞<10/低倍视野,上皮细胞>25/低倍视野。
标本容器溢漏,无瓶盖。
痰标本留取放置时间太长,超过2小时。
未用指定的无菌容器留痰作细菌培养。
标本保存采集标本后立即送到实验室,放置时间不应超过2小时。
、仪器
革兰染液、氧化酶试剂、3%过氧化氢、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。
VITEK鉴定系统;革兰阴性菌鉴定卡(GNI+)、革兰阴性细菌药敏卡(GNS)、革兰阳性菌鉴定卡(GPI)、革兰阳性细菌药敏卡(GPS)、真菌鉴定卡(YBC)、药敏纸片、ATH板条等,有效期及储存条件参见试剂说明书。
接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。
参见《质量管理程序》。
接收标本后,立即对标本进行编号、登记。
肉眼观察包括颜色、黏度、有无血丝或脓。
涂片检查可以确定标本是否适合做细菌培养,直接涂片镜检,依据低倍镜下观察白细胞和上皮细胞数目多少来评定(表5-29)。并可初步判定是否有病原菌存在。
表5-29痰标本镜下分类
注:A、B两种情况的痰标本适合做培养,C不合格,应重新留标本
一般细菌涂片挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片,革兰染色后镜检。
结核分枝杆菌涂片参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》。
放线菌及诺卡菌涂片将痰液用生理盐水洗涤数次,如含血液,则加水溶解红细胞,然后挑取黄色颗粒或不透明的着色斑点,置载玻片上,覆以盖玻片,轻轻挤压,置高倍镜下观察其结构,如见中央为交织的菌丝,末端呈放线状排列,则揭去盖玻片,干燥后作革兰及萋一尼染色镜检。如查见中间部分的菌丝为革兰阳性,而四周放射的末端为革兰阴性,萋一尼染色为非抗酸性者,可报告为“找到革兰阳性杆菌疑似放线菌”。萋尼染色弱阳性则报告“找到革兰阳性杆菌疑似诺卡菌”。
分离培养
培养标本的选择应选择黏液脓痰