文档介绍：任务1 丙种球蛋白分离制备方案的制定
生药1111_11_ 第七组刘行行
项目三丙种球蛋白的制备
目录
丙种球蛋白的基本概述
丙种球蛋白的作用
Sephadex G-50分离制备丙种球蛋白
丙种球蛋白的日常应用
丙种球蛋白的临床实践
丙种球蛋白预防传染性肝炎,预防麻疹等病毒性疾病感染,治疗先天性丙种球蛋白缺乏症,与抗生素合并使用,可提高对某些严重细菌性和病毒性疾病感染的疗效。
预防传染性肝炎,如乙肝、甲肝等。
用于麻疹、水痘、带状疱疹等病毒感染和菌感染的防治。
用于哮喘、过敏性鼻炎等内源性过敏性疾病
与抗生素合并使用,可提高对某些严重细菌性和病毒性疾病感染的疗效。
主要治疗先天性丙种球蛋白缺乏症和免疫缺陷病。
Sephadex G-50分离制备丙种球蛋白
一、简介
Sephadex是由葡聚糖通过环氧氯丙烷交联形成的三维网状凝胶颗粒。
Sephadex凝胶按交联度不同,用Sephadex G加一个数字来区别型号,数字越小,表示介质交联度越大,分级范围越小,反之亦然。
1、实验器材
层析柱(玻璃柱)、铁架台
2、实验材料
样品液:%核黄素(VitB2)与6%丙种球蛋白等量混合置4oC保存。
3、实验试剂:
(1) 洗脱液( ;):/L磷酸二氢钠280ml,混匀。
五、实验过程
1 、—,长度为25cm的层析柱,在上口箍橡皮筋,出口处装上乳胶管,柱内加注蒸馏水2—3ml,排出乳胶管内的气泡,抬高乳胶管防止柱内的蒸馏水排空。自顶部缓缓加入经膨胀的葡聚糖G-50悬液。待底部凝胶沉积2—3cm时将乳胶管放低,仍继续加入上述悬液至凝胶层积至18cm高度即可。操作过程中,应防止气泡与分层现象的发生。让凝胶自然下沉,使表层平整。待凝胶柱层稳定后,以洗脱液(蒸馏水)洗柱5分钟,调节流速至4滴每分钟。
2. 待蒸馏水流至柱面平时,(注意,不可使柱面干掉),马上沿层析柱内壁小心加4滴样品于柱床面,注意尽量不使床面搅动,马上加入1—2倍于样晶体积的蒸馏水,反复两次后,可加大量蒸馏水连续洗脱,这样可以使样品稀释最小。
,柱床上不断加蒸馏水,待红色(血红蛋白)流出一半时记录毫升数,此为血红蛋白Ve也为Vo。继续收集流出液,待黄色(核黄素)流出一半时记录体积,此为核黄素Ve。
(Vt),外水体积(Vo)内水体积(Vi),及核黄素的洗脱体积(Ve)。并计算出Hb及鱼精蛋的分配系数(Kd)。
,洗柱10分钟然后将柱内凝胶回收入凝胶瓶内。