琼脂糖凝胶电泳检测dna.pptx

文档介绍：【一】背景知识
凝胶电泳是分离和纯化DNA片段最常用的技术;
分离、鉴定和提纯核酸首选的标准方法。
根据制备凝胶的材料:
琼脂糖电泳
凝胶
电泳聚丙烯酰胺电泳
【二】实验目的
学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法
检测碱裂解法提取质粒的结果
检测双酶切法鉴定重组质粒的结果
检测PCR法鉴定重组质粒的结果
【三】实验原理
(1)某物质在电场作用下的迁移速度叫做电泳的速率,电泳的速率与核酸分子大小和构型有关。
DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷,在外加电场作用下向正极泳动。分子质量越小跑得越快,紧密构型快于松散型开环分子或线性分子,从而可以分离大小不同的DNA或RNA分子。
(2)琼脂糖是一种线性多糖聚合物,可以形成具有刚性的滤孔,凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。浓度越高,孔隙越小,其分辨能力就越强。
琼脂糖浓度(%)
线型DNA分子的分离范围(Kb)

5~60

1~20

~10

~7

~6

~3

~2
配制多大浓度的琼脂糖凝胶,要根据被检的DNA
分子大小来确定。
(3)溴化乙锭为扁平状分子,在紫外光照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物,其荧光强度与DNA的含量成正比。据此可判断DNA分子量大小和粗略估计样品DNA浓度。
琼脂糖是一种线性多糖聚合物。
浓度越高,孔隙越小,其分辨能力就越强。
琼脂糖浓度(%)
线型DNA分子的分离范围(Kb)

5~60

1~20

~10

~7

~6

~3

~2
【四】仪器、材料与试剂
质粒样品、酶切样品和PCR样品。
凝胶电泳系统和电泳图像分析系统(凝胶成像系统)等。
琼脂糖、 1XTBE电泳缓冲液、溴化乙锭、 6X载样缓冲液( 6X loading buffer)和DNA分子量标准( Lambda DNA / EcoRI + HindIII Marker )等。
凝胶电泳系统
DYY-6C型 双稳定时电泳仪电源(北京六一) 输出范围(显示分辨率):6-600V(1V)      4-400mA (1mA)      240W
美电泳槽Mini-Sub Cell GT Cell
凝胶成像分析系统
Lambda DNA / EcoRI + HindIII Marker(Ferments)
一个已知分子质量的DNA样品做最对照,用来确定待测样品的相对分子质量。