文档介绍：华中科技大学
博士学位论文
外科监护室铜绿假单胞菌多重耐药机制研究
姓名:衣美英
申请学位级别:博士
专业:病原生物学
指导教师:黄汉菊
20060401
独创性声明学位论文版权使用授权书本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到,本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:衣美英本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。不保密口。朐谝陨戏娇蚰诖颉啊獭日期:年指导教师签名:黄汉菊保密口,在年解密后适用本授权书。本论文属于
主要缩略词表华中科技大学同济医学院博士研究生学位论文
列超广谱邗0访及金属酶鳯特异引物扩增其耐药基因。外科监护室铜绿假单胞菌多重耐药机制研究其形成多重耐药的机制一直难以确定。外科重症监护室觕博士研究生衣美英黄汉菊华中科技大学同济医学院病原生物学系中文摘要铜绿假单胞菌常见的条件致病菌之一,且对多种抗生素存在天然和获得的多重耐药性,临床治疗十分困难,尤其在重症监护室,一旦感染,病死率极高。因此对耐药机制的研究,一直是国内外学者研究的重点和难点,但耐药机制非常复杂,尤其是,荘腥咀钛现氐目剖遥鸵┞矢撸鸵┢坠悖1硐治6嘀啬鸵因此,为了解北京大学第一医院铜绿假单胞菌多重耐药机理,我们进行了如下研究:鸵┍硇图癇一内酰胺酶的基因型测定年轮月,从北京大学第一医院临床标本中分离出株非重复,并经脉冲场凝胶电泳证实为非流行株。按美国国家临床试验室标准委员会,年萍龅那碇侗认∈头ǎ舛ǹ股氐淖钚∫志ǘ:;通过一系结果:受检株均对只种以上抗生素耐药,表现为多重耐药,其中对三代头孢菌素头孢噻肟、喹诺酮类环丙沙星和左氧沙星、碳青霉烯类亚安培南耐药率较高,分别为%、ズァ6赃呃髁他唑巴坦刂涡、第四代头孢菌素头孢吡肟、氨基糖苷类抗生素阿米卡星耐药率较低,分别为ァ株菌产荒邗0访%渲瓴鶤.,株产导师,且皆耗诟腥华中科技大学同济医学院博士研究生学位论文ァ%。琍
酶%捶⑾植鹗裘傅木辍K斜蝗匝槿范ㄎ2鶨的株,有昀┰龅絆酶编码基因。以珻—,,琕,琕特异引物进行┰觯捶⑾盅粜跃辍种主动外排系统高表达情况及调控机理研究表达情况;用半定量—陀ü舛縍直鸩舛∕结构基因、的表达水平,借此来判断滞馀疟帽泶锴榭觥高表达狾株菌高表达,株菌表达,株菌表达,并且多重表达现象非常普遍,株菌同时表达只种以上外排泵,其中、两株菌同时表达郑琍昃表达帧>臣蒲Х治觯贛—高表达组和低表达组美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率有显著差异,而其它抗生素耐药率虽然无显著差异,但狾弑泶镒榇蟛糠志甓赃呃髁郑死帷⑼锋哙珉俊鼻系腗比参考菌高叮庑┛股鼐狹—州外排泵很好的底物。外排泵高表达的菌株,表现为对庆大霉素高度耐药为,加泵抑制剂后,陆倍,说明高表达是对庆大霉素高度耐药的机制之一。、州高表达组和未表达组对种抗生素及耐药率虽然无显著性差异,但表达系统的株菌对第四代头孢菌素头孢吡肟的炔慰季鶳叮琍街昃倍曰繁承和左氧沙星耐药,头孢吡肟、环丙沙星和左氧沙星均为的底物,这些菌株对此三种药物的耐药可能与表达有关。表达甇馀畔统的、、、,、、、同时对环丙沙星和左氧沙星耐药,推测这些菌株对此三种药物的耐药可能与甇泶镉泄亍随机选择株高表达的菌株、阭弑泶锏木辍株表达的菌株,分别扩增其调控基因、、庑虿⒂雊泄ú嫉男用〖2舛ㄍ馀疟肕—的结构蛋白、结果:株多重耐药,株高表达主动外排系统,其中株菌华中科技大学同济医学院博士研究生学位论文
列比较,发现昃⑸鷐蛲槐洌鱿职被崽娲渲蠵四株菌发生狝替代,、两株菌发生—娲琍发生猵替代,菌株基因在和之间插入碱基位氨基酸提前出现终止密码子,使长度为霭被岬腗鞍捉囟涛氨基酸,、两株菌未发现基因突变。阭弑泶锏木昃生基因突变,出现氨基酸替代,其中发生替代,发生狝和狶替代。阰泶锏木曛校株菌发生基因突变,出现氨基酸替代,其中发生狦替代,发生狶替代,昃捶⑾謓蛲槐洹R騊膍蛐蛄形醇ǖ迹我们把其序列提交到,申请的序列号分别为、、饽た椎鞍護讲舛为进一步了解对碳青霉烯的耐药机理,我们用〖2舛ㄍ饽た椎白的表达情况,并分析了其表达水平对其他抗生素耐药性的影响。缺失,其中,株表达降低,株表现为丢失。昃1泶锪薕渲株对碳青霉烯敏感,悦缆夼嗄夏鸵┑ǘ匝前放嗄厦舾小失或低表达菌,均表现为对亚胺培南耐药一/捍蟛糠株悦