文档介绍：生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的检测
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1、实验原理:
(1)斐林试剂鉴定还原糖时,溶液的颜色变化为:由蓝色变成砖红色(沉淀)。斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否,而不能鉴定非还原性糖。葡萄糖、麦芽糖、果糖是还原糖。

(2)苏丹Ⅲ染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色,苏丹Ⅳ染液遇脂肪的颜色反应为红色。
(3)蛋白质可与双缩脲试剂产生紫色反应(肽键)。
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(一)生物组织中可溶性还原糖的鉴定

/mL的硫酸铜溶液混合后,立即生成淡蓝色的Cu(OH)2悬浊液。 Cu(OH)2与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热,能够生成砖红色的Cu2O沉淀。因此,利用该反应,可证明样液中含可溶性还原糖。
R—CHO+2Cu(OH)2→R—COOH+Cu2O↓+2H2O
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试剂配制
甲液()
斐林试剂
乙液()
甲液乙液等量混合,现用现配,切不可分开滴加,或者久置后才用。
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(二)生物组织中蛋白质的鉴定
1 实验原理
在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)能与Cu 2+作用,形成紫色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。
由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此,蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。
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试剂配制
A液()
双缩脲试剂
B液()
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2、实验目的:
尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质
3、实验选材(1、材料应富含相关物质,使现象更加明显;2、材料本身应无色,以免对结果产生干扰)
(1)做可溶性还原性糖鉴定实验,应选含糖高,颜色为白色的植物组织,如苹果、梨,也可用白萝卜替代。(因为组织的颜色较浅,易于观察。)
(2)做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子,以花生种子为最好,实验前一般要浸泡3~4小时。
(3)做蛋白质的鉴定实验,可用富含蛋白质的黄豆(可用豆浆替代)或鸡蛋清。
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4、实验试剂
斐林试剂(包括甲液:/ mL NaOH溶液和乙液:/ mL CuSO4溶液)、
苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、
双缩脲试剂(包括A液:/ mL NaOH溶液 B液:/ mL CuSO4溶液)、
体积分数为50%的酒精溶液,碘液、蒸馏水。
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5、方法步骤: (1)可溶性还原糖糖的鉴定(水浴加热)
操作方法
注意问题
解释
1. 制备组织样液。
(去皮、切块、研磨、过滤)
苹果或梨组织液必须临时制备
因苹果多酚氧化酶含量高,组织液很易被氧化成褐色,将产生的颜色掩盖。
2. 取1支试管,向试管内注入2mL组织样液。
3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂,振荡。
应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制,使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂;
切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。
斐林试剂很不稳定,甲乙液分别加入时可能与组织样液发生反应无Cu ( OH ) 2生成。
甲乙液等量混合,现配先用,切不可分开滴加,或者久置后才用。
4. 试管放在盛有50-65℃温水的大烧杯中,加热约2分钟,观察到溶液颜色:浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)
最好用试管夹夹住试管上部,使试管底部不触及烧杯底部,试管口不朝向实验者。
防止试管内的溶液冲出试管,造成烫伤;甲、乙液混合保存时生成Cu ( OH ) 2在70~90℃下分解成黑色CuO和水;
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