大肠杆菌检测实验报告.doc

文档介绍：国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数
实验目的
实验原理:国标法操作的原理
实验器材:
培养箱,10只移液管,12只250ml锥形瓶,5只大试管,试管架,4个平皿,500ml大烧杯1个,电子天平,纱布,脱脂棉,灭菌锅,PH计或PH试纸,电炉,石棉网,铁架台,100ml量筒,橡皮手套,超净台
实验药品:
磷酸盐缓冲液,蒸馏水,LB培养基,琼脂,5%NaOH,5%HCl
实验步骤:
一:
10只移液管,12只250ml锥形瓶,5只大试管,试管架,45个平皿,500ml大烧杯1个,100ml量筒进行洗涤,然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。灭完菌后烘干,完成后放入超净台中。
用酒精灯擦拭超净台,紫外消毒30min
二:
1:用电子天平称取成品LB 。
2:用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中,制成培养基。
3:用棉花堵住该锥形瓶的瓶口,用牛皮纸包住瓶口,用橡皮筋扎牢,再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。
4:灭完菌后放入超净台中备用。
三:
1:取1只无菌250ml锥形瓶,用量筒向其中加入49ml PBS
2:将1ml样品加入到该锥形瓶中,摇匀制成1:50的细菌溶液。
3:取4只试管,编号1—4
4:用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS
5:。
6:用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中,摇匀
7:用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取1ml细菌溶液,加入3中,摇匀......以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。
9:取4只平皿,编号1—4
10:分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取1ml的菌液置于4只平皿中,加入45—50摄氏度温度下的培养基,约15mm厚度。缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀;待培养基冷凝后倒置。
11:将培养基在36摄氏度条件下培养12小时。
12:取出培养皿,选择细菌个数在30至300个之间的平皿数细菌的个数。
四:实验结果(记得在操作过程和得到结果时拍照)
1号,2号菌落个数多不可计,舍弃