文档介绍：实验报告
实验名称 : 班级:
实验人: 实验时间:
研究背景与目的: 掌握还原糖含量测定的方法之一的 3,5- 二硝基水杨酸比色法, 熟悉 722 分
光光度计的主要用途、工作原理及使用流程。
实验原理 :已知在植物体内含有一定量的还原糖,利用还原糖的还原性,使其与 3,5-二硝基
水杨酸反应,生成有吸光性的 3- 氨基 -5 硝基水杨酸。在某浓度范围内,该物质在 540nm 下
的光吸收与还原糖含量成正比, 通过测定该物质的消光值, 查对标准曲线, 便可得样品中还
原糖含量。
仪器与试剂: 722 光栅分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)
电热恒温水浴锅(型号:双列八孔 标号: 09035 天津市中环实验电炉有限公
司)
电磁炉
架盘天平
具塞刻度试管 15ml*9
移液器 100ul — 1000ul
容量瓶 100ml*9
烧杯
研钵
漏斗
2mg/ml 葡萄糖标准液
10mg/ml 3,5- 二硝基水杨酸溶液
蒸馏水
实验步骤:
取 7 只 15ml 具塞刻度试管,编号,分别加入葡萄糖标准液 0、 、 、 、 、 、 
毫升,然后用移液器向各试管加蒸馏水,使最后体积为  毫升,摇匀,再各加入 3,5-二硝
基水杨酸溶液 1 毫升, 摇匀, 在沸水浴中准确加热 5 分钟, 取出冷却至室温, 用蒸馏水稀释
至 15 毫升混匀,用分光光度计在 540nm 下测定消光值。以消光值为纵坐标,葡萄糖含量为
横坐标,绘制标准曲线。
将植物样品—苹果称取 1g 放入研钵中,加入少量石英砂,磨成匀浆,转移到 100 毫升容量
瓶中,用蒸馏水少量多次地清洗研钵,再将洗液转移到容量瓶中,至 70-80ml ,摇匀,置于
80 度恒温水浴中浸提半小时,其间摇匀数次,是还原糖浸出。
待上述提取液冷却到室温,过滤,滤液达十几毫升即可,取滤液 1 毫升放入 15ml 具塞刻度
试管中,加入 1 毫升 3,5- 二硝基水杨酸溶液,摇匀后在沸水浴中准确加热 5 分钟,取出冷却
后稀释到 15 毫升。使用 722 分光光度计测定 OD540 值。(作两个重复组取平均值) 。
数据整理与计算:
标准曲线
度 
光
吸 
浓度 mg/ml
编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
浓度
mg/ml
吸光度
从标准曲线中查出样品的 OD540 值对应的还原糖量 A( mg/ml ),然后按下列公式计算样品
中还原糖含量。
还原糖含量( %) = 【 A* 样品稀释总体积( ml ) /( 样品重 *1000 )】*100%
将数据代入公式,得
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