文档介绍：细胞增殖活性测定技术及其在肿瘤研究和诊断中的应用
病理学教研室
李甘地
April,2004
现代病理形态学新技术
电子显微术
免疫组织化学
原位杂交技术
原位PCR技术
图像分析技术
激光扫描共聚焦显微术
组织芯片技术
这些新技术在目前只是对于病理形态观察和诊断的补充,还不可能替代传统的形态观察和诊断
细胞增殖活性测定的基础
Cell Cycle Howard & Pelc 1951
细胞增殖周期间期与分裂期
间期 DNA合成前期(G1期)
DNA合成期(S期)
DNA合成后期(G2期)
分裂期(M期)
G0期此期细胞不参加增殖,但在适当刺激后可重新加入增殖周期
G1
S
G2
M
G0
Cell Cycle
Growth fraction=S+G2/total cells
细胞增殖活性测定的意义
肿瘤细胞动力学研究
增殖活性与肿瘤的生物学行为的联系
浸润、转移能力、复发、预后
增殖活性和肿瘤治疗的关系
治疗方案的选择、疗效的检测等
注意:
肿瘤的生长速度不仅取决于增殖,而且还取决于死亡(凋亡和坏死)的肿瘤细胞的多少
肿瘤的演进(progression)
恶性肿瘤在生长过程中变得越来越富有侵袭性的现象称为包括生长加快、浸润周围组织和远处转移等。
随着转化细胞增殖代数的增加,越来越多的
肿瘤细胞进入非增殖状态
目前在研究中和临床上常用的技术
测定S期的
3 H标记胸腺嘧啶脱氧核苷标记技术
5-溴脱氧尿嘧啶核苷渗入标记技术
流式细胞术——S期分数测定
测定M期的
传统的形态学核分裂计数
检测与细胞增殖有关核蛋白的
免疫组化技术,如Ki-67,细胞增殖核抗原及AgNORs等
3 H标记胸腺嘧啶脱氧核苷渗入标记技术
用活细胞或新鲜组织与氚(3 H)标记胸腺嘧啶脱氧核苷(Thymidine)孵育1-2小时,有DNA合成能力的S期细胞将摄入3H-TdR合成新的DNA。或者将Thymidine注入实验动物,过一段时间杀死。
新合成的DNA用放射自显影显示后,可直接从形态学上辩认S期细胞。一般以被计数全部肿瘤细胞中S期细胞的百分比作为胸腺嘧啶脱氧核苷标记指数(Thymidine Labeling lndex,TLI)表示其增生活性