文档介绍：实验四血清γ-球蛋白的提纯
生化教研室徐先林
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第三次实验报告总结
实验报告包括实验目的、原理、操作、结果、结论与讨论五部分。
原理写得不完整。
电泳及影响因素;
血清中蛋白质主要有5种,由于蛋白质具有***解离,在pH=,各蛋白质带负电荷,在电泳中向正极移动;
血清中各种蛋白质等电点和分子量不同,在同一电泳过程中运动速度不同而分离;
血清蛋白质能与氨基黑10B特异性结合而显现出蓝色,并将各条带剪下溶解于碱性溶液中,测定吸光度值则可以计算各蛋白相对含量。
实验结论与讨论(不要自问自答,不要分1、2、3...,不要重复原理,不要写思考题,不要写注意事项)
给出结论(注意样品是兔血清,与人血清比较的话,需要说明人和兔血清含量可能有所差异。)
结合结果分析(?什么原因造成的?,说明哪些原因可能会造成各蛋白百分含量偏离正常值?)错别字太多。
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请同学们清洗自己小组以下用品
每个小组:
层析柱(1支)
比色板(2块)
玻璃棒(1支)
离心管(1支)
滴管(2支)
烧杯(2个)
试管(13支)
注意实验过程中每用一次清洗一次!
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问题
?
清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白
?
电泳、透析及超滤、有机溶剂沉淀、盐析、免疫沉淀、层析、超速离心法等
?层析?透析?
加入中性盐破坏蛋白质稳定因素而使其沉淀(水化膜和电荷层)
利用各组分理化性质不同而分离(本实验是利用组分分子大小不同而分离)
半透膜把大小分子分开
?
33%
?
缩二脲反应(紫红色) 或者与磺柳酸反应生成白色沉淀
纳氏试剂(黄色或棕色)
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;
、凝胶层析、透析法分离纯化蛋白质的基本原理;
;
、NH4+定性检测的方法。
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分离纯化蛋白质的方法
沉淀法
盐析法
有机溶剂沉淀法
层析法
电学法
电泳法
等电聚焦
离子交换层析
吸附层析
凝胶过滤(分子筛)
亲和层析
离心
膜分离技术
透析
超滤
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本实验是应用相同浓度的硫酸铵反复盐析分离血清中的γ-球蛋白,再利用凝胶层析法除盐,即可得到比较纯的γ-球蛋白。
采用盐析法分离清蛋白(主要是清蛋白),再用透析方法除去小分子物质。
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(一)盐析(salting-out)
定义:加入大量中性盐以破坏蛋白质的稳定因素并使其从溶液中沉淀析出的现象。
原理: 破坏蛋白质两个稳定因素:水化膜和电荷层
中性盐:(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl等。
优点:蛋白质不变性,常用方法。
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(二)透析(dialysis)
定义:利用半透膜把大小分子分开。
透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜,而大分子物质不能通过半透膜的性质,达到分离的方法。
其利用半透膜原理,通过扩散、对流体内各种有害以及多余的代谢废物和过多的电解质移出体外,达到净化血液的目的,并且达到纠正水电解质及酸碱平衡的目的。
临床应用:血液透析
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(三)层析(chromatography)
层