文档介绍：实验二、无菌操作技术一、实验目的:1、掌握MS固体培养基的配制方法。2、熟悉外植体材料的预处理,掌握其消毒和接种方法。二、实验原理:根据细胞全能性学说,对胡萝卜外植体脱分化培养。三、实验仪器与材料:仪器:高压灭菌锅、超净工作台、镊子、刀、酒精灯材料:胡萝卜四、实验步骤:(一)MS固体培养基的配制《配方单(配制1000ml)》(二)外植体材料的预处理、消毒和接种1、对植物材料进行适当的预处理。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至几小时,主要视植物材料清洁程度而定。2、用洗衣粉水浸洗上述植物材料约5min,再用自来水冲净洗衣粉水。3、接种前准备工作,摆放工具及材料,开紫外灯灭菌。4、在超净工作台上,用70%酒精棉球擦手与器具外壁,即可对经上述预处理的植物材料进行表面灭菌处理,自此以后各步均须在超净工作台上操作。5、在使用灭菌剂之前,先将植物材料浸于75%乙醇灭菌30秒,,%升***浸泡5分钟。6、在灭菌时间结束前1min时,即可将灭菌剂慢慢倒入废物缸,注意勿使植物材料滑出。接着立即倒入适量无菌水,无菌水的清洗时间每次约3min;清洗3-5次。7、取出经上述灭菌处理的植物材料,置于无菌滤纸上,切除各切段或切块上被灭菌剂毒坏的部分。8、接种(1)用70%酒精清洗手及工作台(2)酒精灯下灼烧刀、镊子,放在支架上(3)切割外植体(4)在酒精灯前接种于培养基上,封口。9、培养五、结果:统计植物材料表面灭菌结果;若染菌,分析污染原因。