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二0 年月
家养牛中图际跫捌浞ㄒ窖вτ摘要专业法医学硕士生孙宏钰副教授随着法庭科学、动物遗传学和基因组学的发展,对家养牛进行治龅需求逐渐增加。短串联重复序列琒哂性雍隙雀撸态性好,易于检测,利于实现分型标准化和自动化等优点,成为家养牛析最常用的工具。但由于牛治黾际醭鱿质奔涠蹋谝糯ū昙茄≡窈褪笛方法等方面均尚存在一些缺陷,未能满足司法鉴定实践的需要。为建立能有效进行家养牛个体识别和亲子鉴定的糯ū昙翘逑担臼验拟在家养牛常染色体基因组范围内筛选四核苷酸蜃⒍云浣幸传多态性分析。首先在文献和公共数据库中查找牛四核苷酸蜃庇τ肨砑谂醭H旧寤蜃镈序列中搜索重复单位长度为暾馗创问个或以上且不含插入缺失的峁膊檎业雠K暮塑账酳基因座。应用软件为查找到的基因座设计引物,参数设置为:产物长度,,不含二级结构和发卡结构,引物之间无互补序列存在。共有个基因座的邻近序列满足引物设计要求。利用份无关家养牛样本对这个基因座进行筛选,剔除扩增效率低、有明显阴影带或遗传多态性低的基因座后,最终得到龇中颓逦乃暮苷酸蜃陈爱萍导师中文摘要
对菸薰丶已Q窘姓个蜃牡缬痉中图觳猓魅匪们的等位基因并进行测序,根据的命名规则为各个等位基因命名。在虰数据库中,搜索这鯯基因座的序列,除基因座外,确定其余鯯基因座未经报道过。将基因座的信息提交给获得这龌蜃氖章己挪⒁源硕云浞直鸾忻狥、、和7直鹬票个基因座的等位基因分型标准物,通过与比对获得菁已Q镜幕蛐妥柿稀利用绦蚪蠬胶饧煅楹土黄胶,煅椤个基因座的等位基因频率、个体识别能力珼、。应用软件统计各基因座的基因型频率。按文献报道的公式计算杂合度期望值、非父排除概率⒗刍鎏迨侗鹉芰和累积非父排除概率个蜃份无关家养牛群体样本中分别检出种等位基因和种基因型。龌蜃幕蛐褪菥ü⑿约煅橹な个基因座之间均无明显关联,处于连锁平衡状态。为评估雠K暮塑账酳基因座在法医学上的应用价值,对它们的检测灵敏度、种属特异性、重复性和实际检案应用等进行了研究。应用银染法检测个蜃淖钚模板量为。用砸锒耘!⑷恕⒅怼羊、狗、猫、兔、小鼠和鸡的窘屑觳猓雠T谔匾煨云畏段诩见扩增产物。对肯定亲缘关系的例家系样本进行检测,鯯基因座的分型结果均符合孟德尔遗传规律。采集后放置一天与放置一年的同一份血痕的检测结果一致。来自同一个体的血痕和口腔拭子样本的分型结果一致。对实际案件的检验证实,该分型系统可用于家养牛法医治觥为建立雠K暮塑账酳基因座的复合扩增系统,将龌蜃治组,每组在正向引物的吮昙窍嗤丈ǖ挠ü狻Mü皇笛橛呕疨反应体系的组成和热循环参数,并根据毛细管凝胶电泳的结果调整复合扩增体系中各中山大学硕士学位论文:家养牛中图际跫捌浞ㄒ窖вτ一Ⅱ
基因座的引物浓度,以尽可能保持各基因座扩增效率的平衡。由于基因座和的引物加入复合扩增体系后,无法得到较好的电泳效果,故予以剔除,最后初步建立了家养牛基因座、、.、和的五重春侠┰鎏逑怠结论:本实验在牛基因组序列中筛选出鏊暮塑账嶂馗碨基因座:、、、、、、,其中除外为本实验首次报道。这鯯基因座在中国常见家养牛群体中具有较高的遗传多态性。经法医学应用研究,证实这鯯基因座适用于法医治觥Mü呕疨扩增条件,初步建立了家养牛基因座、、、和的五重春侠┰鎏逑怠1臼笛建立的牛蜃治龇椒ḿ虮恪⒖焖佟⒆既罚捎糜诩已G鬃蛹ɑ蚋体识别的研究。关键词:家养牛,四核苷酸重复,嗵裕ㄒ窖中文摘要
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言引以及细菌、病毒等在内的“非人类分型—法医治鲇捎谄浼ǜ叩氖侗鹇屎土槊舳龋越⒁岳吹亩潭潭嗄间,得到飞速的发展和广泛的应用,现已成为各国刑事侦查和司