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二0 年月
嗫寺】固寮觳庠戮5姆ㄒ窖вτ醚芯中文摘要专业:法医学硕士生:姚亚楠导师:陆惠玲教授将制备的兔抗人抗体进行纯化,验证抗嗫寺】固宕炕昂蟮男ЧT擞妹庖哂〖ḿ觳庠戮:邸⑼庵苎:邸⒁醯酪喊摺⒕喊摺⑼僖喊摺⒛液斑的鞍祝⒔性戮:,盲测验证该方法的可靠性;通过免疫组织化学染色方法检测鞍祝衷戮与阴道液。以期建立用固蹇焖佟⒆既芳觳庠戮5拿庖哐Х椒ǎ解决常规月经血检测方法的局限性,以及技术操作繁琐耗时,不利于实践中快速检测的缺陷,为解决检测月经血的难题建立一种实用的方法。一、抗人嗫寺】固宓拇炕爰本课题组前期已成功制备了兔抗人嗫寺】固澹臼匝椴捎帽和硫酸铵盐析沉淀法对其进行纯化。运用免疫印迹法和蛋白定量法对纯化前后的兔抗血清进行鉴定,,检见目的条带,抗固寰炕蟠慷让飨蕴岣摺二、免疫印迹法检测斑痕收集各种斑痕标本,包括月经血痕、阴道液斑、外周琈一嗫寺中山大学硕士学位论文嗫寺】
血痕、精液斑、唾液斑、尿液斑,提取总蛋白并进行蛋白定量,采用椒ㄒ詌:稀释的纯化抗血清作为一抗检测皇占例觳庋粜缘脑戮#瞥啥垦:郏进行灵敏度检测;分别研究觳庋粜栽戮:塾。⑹椅。下放置天数对检测结果的影响;将外周血和粜缘脑戮:酃例,单盲法进行测定。结果:①月经血痕鞍椎募觳庋粜月饰天的月经血痕检测率差异无显著性意义;②外周血痕、精液斑、唾液斑、尿液斑、.‘时便可有效测出其中所含乖虎芨稍锘肪诚略戮:,保存一年检出阳性率为.%,~℃保存的阳性血痕能正确检测的最长时限为周;⑤げ庋窘峁胍阎1榷裕果正确。提示所建立的方法用来检测斑痕咸匾炜煽浚捎糜诩觳獬旧月经血痕乖三、免疫组织化学染色检测将健康志愿者的新鲜月经血及阴道液分别涂片,同时将室温放置碌陈旧月经血痕进行沉渣涂片,采用链霉卵白素一碱性磷酸酶庖咦榛检测宰灾拼炕寡G遄魑5谝豢固澹锼乇昙茄蚩雇肐为第二抗体。结果新鲜月经血涂片可见分散、着染为紫黑色的子宫内膜细胞阴道液涂片未见阳性染色,陈旧月经血痕沉渣涂片染色后罕见完整细胞,特异信号微弱,无法判断结果。表明免疫组化方法能检测月经血的白,但不适宜检测月经血痕中的北砻饕醯酪翰缓琈.。中山大学硕士学位论文嗫寺】固寮觳庠戮5姆ㄒ窖вτ醚芯
结论:自制的抗嗫寺】固寰哂薪锨康淖橹匾煨浴K法能检测月经血中的捎糜谠戮<巴庵苎!⒁道液、精液、唾液、尿液等常见斑痕的鉴别,具有应用于法医实际检案的广关键词:法医学;多克隆抗体;月经血的阔前景。基质金属蛋白酶.;中山大学硕士学位论文嗫寺】固寮觳庠戮5姆ㄒ窖вτ醚芯
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,有时出血部位的确认显得尤为重要。例如在性侵害案件的调查中,需要对申称受害的女性提供的血痕鉴定其为正常的生理性出血戮还是阴道出血,以明确该血痕是属于性侵害造成的损伤性出血还是月经血,这对于明确案件性质、排除人为用月经血伪造、嫁祸的可能性至关重要,检测方法的灵敏度及准确性直接关系到破案的顺利进行。月经血检测一直是法医学实践中的一个难题。目前较成熟的月经血鉴定方法主要为检测纤维蛋白原降解产物的抗纤维蛋白血清试验或变性纤维蛋白混浊试验。月经血中不仅有血纤维蛋白溶酶,还有从子宫内膜来的组织激活酶,后者可以使血中的纤维蛋白溶酶原继续转交为纤维蛋白溶酶。由于月经血中有大量纤维蛋白溶酶,故可利用之以鉴别血迹来源。但精液中也有纤维蛋白溶解酶、尸体血与月经血所含可溶性纤维蛋白的量几乎相等,检验时需要首先排除检材中混有精液或尸体血污染的可能,因此限制了此方法的应用【俊3酥猓褂邢赴Ъ觳椤⑷樗嵬亚饷同功酶检测及测定血痕中孕激素浓度鉴定月经血等方法】。但细胞学方法不能区分月经血和其它种类的女性生殖器出血;检测乳酸脱氢酶同功酶的方法不能鉴别陈旧血痕,存在对检材量和时间要求过高、检测的灵敏度和特异性较低等不利因素。因此,寻求一种能准确检测月经血的标志物,建立灵敏可靠的月经血鉴定方法一直是法医学界急需解决的难题。中山大学硕士学位论文多克隆抗体检测月经血的法医学应用研究
基质金属蛋白酶..,殖萍渲嗜易宄稍敝弧且蛔榻峁褂牍δ芡吹膠览敌缘鞍酌超基因家族,所有的都含有至少三个相似的结构域,从氨基端端到羧基端端来挝