文档介绍：血液常规检验
一、微量吸管的使用、毛细血管采血、计数板的鉴定与使用
【实验目的】:掌握微量吸管的使用、毛细血管采血、计数板的鉴定、构造与使用。
【实验试剂】:红细胞稀释液、75%乙醇、消毒药棉。
【实验器材】: 一次性采血针、计数板、盖玻片、微量吸管、2ml吸管、中号试管、显微镜、小玻璃棒。
【实验原理】:一次性采血针刺破毛细血管后,用微量吸管吸取一定量的血液,稀释一定的倍数,冲入计数池计数一定体积内的细胞的数量。
【实验方法】:一、微量吸管的使用:用抗凝血训练微量吸管的使用。
二、毛细血管采血(以红细胞计数为例):
准备:取清洁干燥试管一支,加2ml红细胞稀释液。
采血部位选择、按摩→75%乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒→待酒精挥发干(否则血流不成滴)→自指尖腹内侧迅速刺针→擦去第一滴血→准确吸取10ul血液→用无菌干棉球压住伤口止血→用无菌干棉球擦去管尖外围余血后→将血液释放到稀释液底部→回吸上清液2-3次→轻轻混匀。
三、计数板构造与应用
外观构造:每块计数板由“H”型凹槽分上下两个计数室,在计数室两侧各有一条支柱,,将一块平整光滑的血细胞计数专用盖玻片(××)覆盖其上时,。
格子构造:计数池长、宽各3mm,平均分成9个大格, mm3四角的四个大方格分别用单线划分成16个中方格,是白细胞计数区域;中央的大方格用双线条划分成25个中方格,每个中方格又用单线划分成16个小方格,其中四角和正中的5个中方格是红细胞计数区域。
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用清洁干燥柔软的纱布擦拭计数板及盖玻片→用推盖法从计数板下缘向前平推盖玻片将其盖在计数室上→充分混匀细胞悬液→充池→静置→观察细胞分布情况(若严重不匀,应重新充池。)
【注意事项】:
,不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。
,深度适宜(约2-3mm)。待血液自行流出,擦去第一滴血。
。若血流不暢,可以左手自采血部位远端向指尖稍压力至血液流出为止。切忌用力挤压,造成组织液混入,影响结果准确性。
,以访油腻污染,致使充液时起泡。
二、血涂片的制作,瑞氏染色
【实验目的】:掌握血片制作方法,瑞氏染色原理及方法。
【实验试剂】:瑞-吉氏复合染液(Ⅰ液、Ⅱ液)
【实验器材】:显微镜、载玻片、推玻片、一次性针头、消毒棉球、洗耳球
【实验原理】:细胞的着色既有化学的亲和作用,又有物理的吸附作用,不同的细胞由于其所含化学成分不一样,化学性质各不相同,所以对染料的亲和力也不一样,因此将细胞染成不同的颜色。
【实验方法】:一、瑞一吉氏复合染液配制
Ⅰ液:取瑞特染粉1g,,置洁净研钵中,加少量甲醇(分析纯),研磨片刻,吸出上层染液,再加少量甲醇,继续研磨,再吸出上层染液。如此连续几次,共用甲醇500ml。收集于棕色瓶中,每天早晚各振摇3
′共5天,再存放一周,将染液过滤后即可使用。
Ⅱ液:磷酸盐缓冲液(—),取磷酸二氧钾(无水),磷酸***二钠(无水),加少量蒸馏水溶解,调整PH后,加水至1000ml。
二、血片制作、瑞氏染色方法
准备:取清洁干燥载玻片,边缘光滑清洁推玻片各一张。
1、制备血涂片:取载玻片→取血1滴于载玻片右端()→左手持载玻片,右手持推玻片→将推玻片放至血滴前沿逐渐后移至血滴沿推片散开后,推玻片与载玻片成30°~35°的夹角以平稳的速度将血液向前推进→干燥(手持载玻片末端迅速在空气中挥动干燥)。
2、染色:将干透的血涂片放在水平位置→加瑞吉氏复合染液Ⅰ液数滴,以染液覆盖整个血膜为度→~1min→滴加约2倍于Ⅰ液量的Ⅱ液→用洗耳球吹气混匀→染色5-10min→平持玻片用流线型水洗→干燥→镜检
【注意事项】:
。
、血黏度高、推片角度大、速度快则血膜厚,反之则血膜薄。
,美兰逐渐氧化为天青,染色效果越好。
,室温低,细胞多则染色时间长,反之减少染色时间。
,不要先倒掉染液。
三、白细胞计数(WBC)
【实验目的】:掌握白细胞计数的原理、操作方法与结果报告。
【实验原理】:用白细胞稀释液将全血稀释一定的倍数并破坏红细胞,充入血细胞计数池,显微镜下计数一定体积的白细胞数,经换算求出每升血液中的白细胞数量。
【实验试剂】:白细胞稀释液
【实验器材】: 显微镜、改良Ne