文档介绍：中华大蟾蜍蟾酥中蟾毒内酯类化学成分研究
[摘要] 采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、凝胶柱色谱、制备型高效液相等方法从蟾酥的二***甲烷萃取部位中分离得到12个蟾毒内酯类化合物,根据化合物的理化性质和波谱数据分别鉴定为脂蟾毒配基(1)、蟾蜍它灵(2)、去乙酰华蟾蜍精(3)、19-氧去乙酰华蟾蜍它灵(4)、华蟾蜍它灵(5)、1β-羟基蟾蜍灵(6)、12α-羟基蟾蜍灵(7)、蟾蜍它里灵(8)、嚏根草配基(9)、远华蟾蜍精(10)、嚏根草醇(11)及华蟾蜍精-3-辛二酰甲酯(12)。化合物7和12为首次从蟾酥中分离得到,且为新天然产物。
[关键词] 中华大蟾蜍;蟾酥;蟾毒内酯;化学成分
[收稿日期] 2013-10-28
[基金项目] 国家自然科学基金项目(81102518)
[通信作者] *田海妍,副研究员,研究方向为中药及天然药物有效成分研究,Tel:(020)38375205, E-mail:tianhaiyan1982@
[作者简介] 张鹏伟,硕士研究生,Tel:(020)85221016, E-mail:@
蟾酥Venenum Bufonis为中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍B. melanostictus Schneider的耳后腺及皮肤腺分泌的白色浆液经加工干燥而成,具有解毒、止痛、开窍醒神之功效[1]。现代药理学研究表明蟾蜍内酯类化合物是中药蟾酥的主要活性成分。蟾酥总提物及其单体化合物均显示了明显的抗肿瘤活性[2-3]。由蟾皮制成的华蟾素注射液在临床上广泛用于肿瘤的治疗[4-5]。近年来, 蟾酥中强心甾类化合物引起人们的广泛关注,除了具有显著强心活性外,还显示了很强的抗肿瘤活性, 部分该类化合物具有较好的新药开发前景[6-8]。因此,对于中药蟾酥中蟾毒内酯类化学成分进行研究有重要的意义。
本研究对蟾酥的二***甲烷萃取部位进行了系统化学成分研究,从中分离得到了12个强心甾类化合物,利用1H,13C-NMR以及与文献数据对比等手段,鉴定了这些化合物的结构,分别为脂蟾毒配基(1)、蟾蜍它灵(2)、去乙酰华蟾蜍精(3)、19-氧去乙酰华蟾蜍它灵(4)、华蟾蜍它灵(5)、1β-羟基蟾蜍灵(6)、12α-羟基蟾蜍灵(7)、蟾蜍它里灵(8)、嚏根草配基(9)、远华蟾蜍精(10)、嚏根草醇(11)及华蟾蜍精-3-辛二酰甲酯(12)。其中化合物7和12为首次从蟾酥中分离得到,且为新天然产物(图1)。
1 材料
北京泰克仪器公司 X-5 型显微熔点测定仪(温度计未校正)测定;日本JASCO P-1020 型旋光仪测定;Bruker AV-400型超导核磁共振仪;Finingan LCQ Advantage MAX 质谱仪,Agilent 1200分析型高效液相色谱仪,伍丰LC-100液相色谱仪,Ultimate XB-C18( mm×250 mm,5 μm,Welch Materials)分析柱,Cosmosil ODS( mm×250 mm,日本Nacalai Tesque Inc)制备柱,Sephadex LH-20凝胶(Pharmacia公司),柱色谱用硅胶(青岛海洋化工),薄层硅胶板(烟台化学工业研究所),RP-18 F254薄层预制板和ODS RP-18柱色谱材料(Merck公司),所用试剂均为分析纯和色谱纯。
实验用药材蟾酥于2008年8月自江苏宝应蟾蜍养殖基地采集。经暨南大学周光雄教授鉴定为中华大蟾蜍B. bufo gargarizans的蟾酥。标本(No. 2008082001)保存暨南大学中药及天然药物研究所。
2 提取与分离
kg粉碎成粗粉,10倍量95%乙醇超声提取3次,每次45 min (40 ℃, 100%功率),合并提取液,过滤,减压浓缩得浸膏约900 g,混悬于20%乙醇中,CH2Cl2萃取3次,合并萃取液,减压浓缩得二***甲烷的萃取部分321 g。TLC薄层及 HPLC分析,显示CH2Cl2萃取部分主要为蟾毒内酯类化合物。取二***甲烷的萃取部分150 g,经硅胶柱色谱(100~200目),环己烷***梯度洗脱(1∶0,5∶1, 3∶1, 1∶1, 0∶1),共得到15个流分(Fr. 1~Fr. 15)。
图1 化合物1~12的结构
Chemical structures pounds 1-12
Fr. 4经RPHPLC(60%甲醇)分离得化合物1( mg);Fr. 5经硅胶柱色谱(200~300目),环己烷***梯度洗脱得5个流分(Fr. ~Fr. ),Fr. (70%甲醇)制备得化合物3( m