文档介绍：微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告
一、实验目的
(未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等)
二、实验原理
凯氏定氮法常用于测定天然有机物(如蛋白质,核酸及氨基酸等)的含氮量。
当天然含氮有机物与浓硫酸共热时,其中的碳、氢被氧化成二氧化碳和水,而氮则变成氨并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程称为“消化”。
此过程进行的相对较为缓慢,通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高溶液的沸点,并加入硫酸铜作为催化剂,以促进反应的进行。氧化剂过氧化氢也能加速反应。
消化过程:
蒸馏:在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性,加热
蒸馏,即可释放出氨气。
反应方程式如下:
吸收与滴定:蒸馏所放出的氨,可用硼酸溶液进行吸收,待吸收完全后,再用盐酸标准溶液滴定,直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止(即滴定至蓝紫色),最后根据所用标准酸的当量数(相当于待测物中氨的当量数)计算出待测物中的氮量。
三、实验试剂、材料和器材
实验材料:食用面粉。
实验试剂:浓硫酸、30%氢氧化钠溶液、克氏催化剂、2%硼酸、指示剂、 HCL。
实验器材:凯氏烧瓶、电炉、凯氏定氮蒸馏装置、锥形瓶、100ml容量瓶、酸式滴定管。
四、操作步骤
(1)准确称取1克食用面粉,用称量纸卷好小心送入至50毫升的凯氏烧瓶底部,切勿沾于瓶口或瓶颈上;
(2)向另一烧瓶加入1ml水作空白对照;
在每个烧瓶内加入硫酸钾—硫酸铜混合物(克氏催化剂)少许,浓硫酸10ml,小瓷片两粒,摇匀;
(3)将烧瓶约60度角固定在铁架上,每个瓶口放一小漏斗,在通风厨内的电炉上消化;
(4)在消化开始时,应控制火力,不要使液体冲到瓶颈;
(5)待瓶内水汽蒸完,硫酸开始分解并放出SO2白烟后,适当加强火力,继续消化,直至消化液呈透明绿色为止;
(6)消化完毕,待烧瓶内容物冷却后,加蒸馏水10ml(注意慢加,边加边摇);
(7)冷却后将瓶中内容物转入100ml的容量瓶中,并用蒸馏水洗烧瓶数次,溶液一并倒入容量瓶,最后定容至刻度摇匀,做上记号备用。
(1)蒸馏器洗净后,开放水龙头P3,使水进入A室,水放至A室球部2/3处即可。
(2)取3个50ml的锥形瓶,分别加入10ml硼酸(内加有混合指示剂)。用表面皿复盖备用。
(3)加样
①用移液管吸取2ml消化液,小心地由漏斗D倾入B室;
②取一个盛有硼酸的锥形瓶,置于M管下,使管口恰好接触
硼酸溶液,用量筒从漏斗D加入30%氢氧化钠5ml,随即将P4夹紧,并往漏斗加入少量蒸馏水封闭。
(4)蒸馏
①用酒精灯加热,维持火力恒定,沸腾不可高于Y管口以免A室溶液从Y管倒吸,待第一滴蒸馏液从冷凝柱F顶端滴下时起,继续蒸馏5分钟;
②然后将锥形瓶放低,使导管离开液面再蒸2分钟,最后用蒸馏水洗导管外壁,蒸馏完毕,取下锥形瓶准备滴定。
(5)空白蒸馏
①用移液管分别吸取2ml蒸馏水按上述操作步骤进行蒸馏。
L
H
仪器的洗涤:
(1)蒸馏完毕,用微量酸式滴定管, 盐酸标准溶
液进行滴定锥瓶内溶液,溶液由蓝绿色变为淡紫色或灰色,即为终点。
(2)记录所用盐酸的量。
若测定的样