酶联免疫吸附试验双抗体夹心法2.ppt

文档介绍：医学免疫学实验
实验三
(一)免疫标记技术
1、酶联免疫吸附试验(双抗体夹心法)
2、斑点免疫层析试验
(二)免疫细胞的分离与纯化
(含淋巴细胞)
(三)免疫细胞功能测定
1、E玫瑰花环试验(示教)
2、淋巴细胞转化试验(示教)
(四)结核病相关的免疫试验简介
(一)1、酶联免疫吸附试验(ELISA)
待检标本阴性对照空白对照
(标准品稀释液100ul)
“ELISA双抗体夹心法”,(第5-11步)第5步,最后5孔,加待检标本2孔、阴性对照1孔、空白对照(标准品稀释液) 2孔,每孔100ul,37℃,30分钟:
8 9 10 11 12
(一)1、酶联免疫吸附试验(ELISA)
“ELISA双抗体夹心法”,第5步,1-7孔加不同稀释度(浓度)TNF-α标准品,每孔100ul,37℃,30分钟:
TNF-α 100ul 100
稀释液 100 100 100 100 100 100
弃去100
100ul 100 100 100 100
TNF-α 1000 500 250 125
浓度
(pg/ml)
1 2 3 4 5 6 7
(倍比稀释)
“ELISA双抗体夹心法”,第5步,1-7孔加不同浓度TNF-α标准品;后5孔加待检标本2孔、阴性对照1孔、空白对照(标准品稀释液) 2孔;每孔100ul,37℃,30分钟:
100μl 100
2 稀释液
100 100 100 100 100 100
弃去100
100ul 100 100 100 100
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
1000 500 250 125
TNF-α
(pg/ml)
①②③
①待检标本
②阴性对照
③空白对照
(一)1、酶联免疫吸附试验(ELISA)
(一)免疫标记技术
【概念或原理】: 利用荧光素、酶、胶体金、发光物质以及放射性核素等易显示物(标记物)连接于已知抗体或抗原,再去检测待测标本中的相应抗原或抗体的量或其存在与否。优点:高度的敏感性和特异性,简便、快速,可作定性、定量或定位测定。
【分类】
荧光免疫技术
酶免疫技术→ELISA(双抗体夹心法)
放射免疫技术
金免疫技术→斑点免疫层析试验
化学发光免疫技术等
Ag
+ Ab
荧光素
Ag
-Ab-荧光素
+ Ab
荧光素
(?)
+ Ab-荧光素
(洗涤)
免疫标记技术举例:
(细胞表面可见荧光)
8
cells with fluorescence
tubercle bacillus with fluorescence
10