文档介绍：糖的定量分析---还原糖的测定 刘敏 -12
生命科学学院
生物化学实验
Why, What, How
Traditional
biochemistry
principles
Big Data
+
Analysis
True
&
False
一、目的
二、原理
三、试剂与器材
四、步骤
五、结果计算
六、注意事项
七、思考题
一、目的:
理解还原糖的基本特征,掌握碱性铜试剂法测定还原糖的原理和操作方法
二、原理
单糖以及含有游离醛基或***基的寡糖,具有还原性,属于还原糖类;多糖和蔗糖等属于非还原性糖(?思考)。利用多糖能被酸水解为单糖的性质,可通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。
还原糖测定的滴定方法有多种,本实验采用硫代硫酸钠间接滴定法(还有其它的滴定方法吗?)。
H
葡萄糖分子(链式)
葡萄糖分子(环式)
半缩醛羟基
硫代硫酸钠间接滴定法原理:在碱性溶液中,二价铜离子被还原糖还原成一价的砖红色氧化亚铜(Cu2O)沉淀——Fehling’s solution (1849)
氧化亚铜在酸性环境中与定量的过量碘起反应(氧化)成二价铜(蓝色),再用标准硫代硫酸钠滴定剩余的碘,即可算出还原糖的含量。
2NaOH + CuSO4=Cu(OH)2↓+ Na2SO4
COOK COOK
Cu(OH)2 + H―C―OH = H―C―O
H―C―OH H―C―O
COONa COONa
Cu + 2 H2O
酒石酸钾钠
可溶性的氧化铜络合物(蓝色)
COOK
H― C ―O
H―C ―O
COONa
Cu
CHO
(CHOH)4+ 2 H2O = 2
CH2OH
COOK
H― C ―OH
H―C―OH
COONa
COOH
( CHOH)4
+ Cu2O↓
CH2OH
+
+
2
葡萄糖
酒石酸甲钠
葡萄糖酸
反应方程式:
IO3¯ + 5 I¯ + 6 H 3 I2 + 3 H2O
+
Cu2O + I2 + H Cu + I -+ H2 O
+
2+
I2(剩余的) + 2(Na+ +S2O3) S4O6 + 2 I-
2-
2-
因此,用硫代硫酸钠滴定剩余的碘,在有已知浓度的标准还原糖浓度时,可以间接地计算出未知样品的还原糖的含量。
碱性铜试剂:硫酸铜+ 草酸钾
Fehling试剂:硫酸铜+ 酒石酸钾钠
Benedict试剂:硫酸铜+ 柠檬酸钠+无水碳酸钠
用于尿糖的鉴定,较稳定可长期保存(1911)
碱性铜试剂类作用原理相同,络合二价铜离子。
稳
定
性
光化学法和电化学法;抽血和非抽血