文档介绍：番茄红素抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的实验研究
[摘要] 目的探讨番茄红素对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法用CCK-8 法检测不同浓度番茄红素作用于U251细胞24 h、48 h 及72 h后细胞的存活率;应用流式细胞术(FCM)检测细胞周期。结果番茄红素能抑制人脑胶质瘤U251细胞的生长,呈量-效及时-效关系(P<);FCM 检测表明,细胞主要被阻滞在G0/G1期;番茄红素诱导细胞凋亡率较对照组明显增加(P<),具有浓度依赖性。结论番茄红素能抑制U251 细胞增殖,诱导细胞凋亡。
[关键词] 番茄红素;神经胶质瘤;细胞凋亡
[中图分类号] [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2013)27-0003-02
番茄红素是番茄等植物中含有的一种具有抗癌活性的烃类类胡萝卜素A,研究发现,番茄红素通过抗氧化、清除组织自由基及调控癌细胞增殖等作用促进多种肿瘤细胞的凋亡。本研究旨在从细胞凋亡方面探讨番茄红素对胶质瘤U251细胞生长的影响,现报道如下。
1 材料与方法
实验材料
人脑胶质瘤细胞株U251(购于武汉博士德生物工程有限公司),番茄红素(购自成都格雷西亚化学技术有限公司),四氢呋喃(THF,稀释番茄红素用),细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-K-8)(购自武汉博士德生物工程有限公司),流式细胞仪(FCM,美国BD公司),酶联免疫仪(中科院生产)。
细胞培养
将U251细胞接种于DMEM培养液中(含有100 U/mL链霉素、100 U/mL青霉素、%NaHCO3及10%胎牛血清),放在5%CO2、37℃孵箱中进行培养。
K-8法)
将浓度为1×104个/mL的对数期U251 细胞接种至96孔板内。本实验按时间长短(24 h、48 h、72 h)分三组,每组再分为不同浓度( μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L、15 μmol/L)的番茄红素处理组及只有稀释溶剂THF的空白对照组,每组设立5个重复孔加强实验准确性。各组细胞经过一段时间的培养(细胞相对稳定)后更换为对应浓度番茄红素的培养液,再经不同时间(24 h、48 h及72 h)培养后,每孔加入10 K-8 溶液后孵育1 h,观察各组细胞的生长状态,用酶标仪检测其在450 nm波长时的光密度值。
检测细胞周期
培养48 h后,收集不同浓度( μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L、15 μmol/L)的番茄红素处理组及稀释溶剂THF空白对照组,调整细胞浓度至1×105个/mL,分别取5 mL实验样本进行相关处理后,FCM检测各组U251肿瘤的细胞周期分布。
统计学分析
。计量资料以均数±标准差(x
±s)表示,P<。不同实验组间采用单因素方差分析等统计学方法,并用t检验进行组间比较。
2 结果
番茄红素对人脑胶质瘤细胞存活率的影响
番茄红素对人脑胶质瘤U251细胞的抑制作用:检测各实验组细胞的存活率(K-8法),当前存活率即同一浓度处理组OD 值均值与对照组OD 值均值的比值