文档介绍：实验五血清总胆固醇测定
浙江中医药大学
生命科学学院
生物化学教研室
【实验目的】
学习血清总胆固醇测定的实验原理。
掌握总胆固醇的测定方法和操作技术。
【实验原理】
血清脂类包括甘油三酯、胆固醇、胆固醇酯、磷脂、糖脂、游离脂肪酸。它们在血液中以脂蛋白(脂和载脂蛋白的复合体)的形式存在。用超速离心技术可把血浆脂蛋白分成四大族:CM、VLDL、LDL、HDL,用电泳技术可把血浆脂蛋白分成α-脂蛋白、前β-脂蛋白、β-脂蛋白、CM。
血清中总胆固醇(TC)包括游离胆固醇FC和胆固醇酯(CE)两部分。胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA),胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成Δ4-胆甾烯酮和过氧化氢,H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时,经过氧化物酶催化,反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物,其颜色深浅与标本中TC含量成正比。
【试剂与器材】
、板条、微量进样器、微量移液器
、酶标仪
4. 血清
【操作步骤】
配制工作试剂:
,,置于10ml玻璃试管中
取酶标板1块,板条1条,按下表操作:
℃生化培养箱10min,492nm波长处在酶标仪上读取各管的吸光度A。
结果与计算
血清总胆固醇=
测定管吸光度平均值
标准管吸光度平均值
×
标准物浓度
【参考值】:
胆固醇:
血清参考值:3~;
危险阈值:~;
高胆固醇血症:>。
【临床意义】---了解
TC增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性apoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。
TC降低常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病,如癌症晚期等。
【注意事项】
胆固醇:
标本采集:空腹12h采血,避免溶血。可用下列抗凝剂,直至所列浓度对结果没有明显影响,EDTA 25mg/ml;枸橼酸钠50mg/ml;草酸盐50mg/ml;肝素2mg/ml;氟化物10mg/ml。
标本保存:血清胆固醇在室温(25℃)或2-8℃冷藏可稳定7天,在-20℃密集冷冻可稳定数月,血浆中胆固醇稳定性同血清。