文档介绍：紫外-可见分光光度法
原理、应用及有关注意事项
第一节概述
紫外-可见分光光度(UV-VIS)法是一种常用的检验方法,它是通过被测物质在紫外光区的特定波长或一定波长范围内的吸光度,对该物质进行定性和定量分析的方法。
紫外光谱是物质在200~400 nm的近紫外光区和400~850 nm的可见光区的吸收光谱。通常使用的紫外-可见分光光度计的工作波长范围为190~900nm,本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。适用于微量和痕量组分的分析,测定灵敏度可达到10-4~10-7g/ml或更低范围。
第二节原理
紫外分光光度法之所以能成为一种分析方法,主要依据两点:
一、就是我们常说的吸收度,2005年版药典已将它改为吸光度,这样说可能更准确些。就是物质对光的吸收程度。我们首先说一下电磁波,所有电磁波在性质上都完全相同的,他们之间的区别仅在于波长或频率的不同。
按照波长排列从短到长依次为r射线、x射线、紫外线、可见光、红外线、微波、无线电波等。电磁辐射源与物质作用时,会与物质间产生能量交换。按物质和辐射能的转换方向,光谱法可分为吸收光谱法和发射光谱法两大类。电磁辐射源照射试样时,其原子或分子选择吸收某些具有适宜能量的光子,使相应波长位置出现吸收线或吸收带,所构成的光谱为吸收光谱。
利用物质的吸收光谱进行定量、定性及结构分析的方法称为吸收光谱分析法。紫外-可见吸收光谱是一种分子吸收光谱,它是由于分子中原子的外层电子跃迁而产生的。
因此,紫外吸收主要决定于分子的电子结构,故紫外光谱有称为电子光谱。在不同的波长下测定物质对光吸收的程度(吸光度),以波长为横坐标,以吸光度为纵坐标,所绘制的曲线称为吸收光谱,测定的波长范围在紫外-可见区,称紫外-可见光谱,简称紫外光谱。
由上图可以看出吸收光谱的特征: ⑴曲线上“A”处称最大吸收峰,它所对应的波长称最大吸收波长,以λmax表示。 ⑵曲线上“B”处有一谷,称最小吸收,所对应的波长,称最小吸收波长,以λmin 表示。 ⑶曲线上在最大吸收峰旁边有一小峰“C”,形状像肩的部位,称肩峰,以λsh表示。
⑷在吸收曲线的波长最短的一端,曲线上“D”处,吸收相当强,但不成峰形,此处称为末端吸收。
二、Beer-lambere定律,它是描述物质对单色光吸收强弱与吸光物质的厚度和浓度间关系的定律。
数学表达式为A=ELC A为吸光度,吸光度与浓度或厚度之间是正比关系,其中E是比例常数,称为吸光系数。
正是由于Beer-lambere定律的发现,吸光度才与物质的浓度联系起来,紫外分光光度法才应用于物质的测定。
第三节应用
上面简单讲了紫外分光光度法的工作原理,下面系统讲一下紫外分光光度法的应用,主要讲一下它在药品检验中各种用途。
某些物质的吸收光谱上可出现几个吸收峰,不同的物质有不同的吸收峰。同一物质的吸收光谱有相同的λmax,λmin ,λsh ;而且同一物质相同溶度的吸收曲线应相互重合。这句话揭示了紫外分光光度法的应用依据。
应用主要分四个方面: