文档介绍：高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography,HPLC
高效液相色谱法(HPLC)是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术,随着不断改进与发展,目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。
它是在经典液相色谱基础上,引入了气相色谱的理论,在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器,因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。为了更好地了解高效液相色谱法优越性,现从两方面进行比较:
第一节概述
HPLC优点:高速、高效、高灵敏度、高自动化。
高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由于经典色谱是重力加料,流出速度极慢;而高效液相色谱配备了高压输液设备,流速最高可达 10cm3·min-1.
如分离苯的羟基化合物,7个组分只需1min就可完成。
对氨基酸分离,用经典色谱法,柱长约170cm,,流动相速度为30cm3·h-1,需用20多小时才能分离出20种氨基酸;而用HPLC,只需lh之内即可完成。
又如用25cm×-ODS(5μ)的柱,采用梯度洗脱,.
第一节概述
(1)GC分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物,它们仅占有机物总数的20%。对于占有机物总数近80%的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质,目前主要采用HPLC进行分离和分析。
(2)GC采用流动相是惰性气体,它对组分没有亲和力,即不产生相互作用力,仅起运载作用。而HPLC中流动相可选用不同极性的液体,选择余地大,它对组分可产生一定亲和力,并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此,流动相对分离起很大作用,相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数,这为选择最佳分离条件提供了极大方便。
第一节概述
(3)GC一般都在较高温度下进行的,而HPLC法则经常可在室温条件下工作。
总之,HPLC是吸取了GC与经典液相色谱优点,并用现代化手段加以改进,因此得到迅猛的发展。目前HPLC已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质,例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。
HPLC主要缺点:仪器设备费用昂贵,操作严格。
第一节概述
3. 液相色谱分离原理及分类
和GC一样,LC分离系统也由固定相和流动相组成。其固定相可以是吸附剂、化学键合固定相(或在惰性载体表面涂上一层液膜)、离子交换树脂或多孔性凝胶;流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。
色谱分离的实质是样品分子(以下称溶质)与溶剂(即流动相或洗脱液)以及固定相分子间的作用,作用力的大小,决定色谱过程的保留行为。
根据分离机制不同,液相色谱可分为:液固吸附色谱、液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。
第一节概述
第二节高效液相色谱仪器
第二节高效液相色谱仪器
一、流程(process of HPLC)
首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱,然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时,流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离,然后依先后顺序进入
检测器,记录仪将检测器送出的信号记录下来,由此得到液相色谱图。
二、主要部件(main assembly of HPLC)
第二节高效液相色谱仪器
4(6)个主要部分:
高压输液系统;
脱气装置;
梯度洗脱;
进样系统;
分离系统;
检测系统;
此外还配有自动进样及数据处理等辅助装置。