质粒DNA的提取小麦黄化苗核DNA的提取DNA的鉴定.ppt

文档介绍：质粒DNA的提取
小麦黄化苗核DNA的提取
DNA的鉴定——琼脂糖电泳
DNA酶切
DNA回收、连接
质粒转化大肠杆菌
质粒DNA的提取
一、实验目的
学****质粒的相关基本知识
掌握碱裂解法提取质粒DNA的原理和方法
质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主的细胞质中。
质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。
质粒的存在使宿主具有一些额外的特性,如对抗生素的抗性等。常见的天然质粒有F质粒(又称F因子或性质粒)、R质粒和Col质粒。
二、相关基本知识
质粒在细胞内的复制一般有两种类型:
紧密控制型(Stringent control)
松驰控制型(Relaxed control)
前者只在细胞周期的一定阶段进行复制,当染色体不复制时,它也不能复制,通常每个细胞内只含有 1 个或几个质粒,如 F 因子。
后者的质粒在整个细胞周期中随时可以复制,在每个细胞中有许多拷贝,一般在 20 个以上,如 Col质粒。
一个理想的质粒克隆载体应具有的特性:
(1)分子量小;
(2)多拷贝、松驰控制型;
(3)具有多种常用的限制性内切酶的单酶切位点,即多克隆位点(MCS, multiple cloning sites);
(4)能插入较大的外源DN***段;
(5)具有容易操作的检测表型。如抗生素抗性、 a-互补显色反应(蓝白斑筛选)
常用的质粒载体大小一般在1kb至10kb之间,克隆载体如:pGEM-T、pUC-mT和pBluescript(简称pBS)等,表达载体如:p1300质粒等
质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的。常用的质粒载体可以分为克隆载体和表达载体
pBluescript II
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