文档介绍：FNCPLSDM00040 水稻种子生活力的测定染色法
F-NCP-LS-DM-00040
水稻种子-生活力的测定-染色法
1 适用范围
本方法适用于水稻种子生活力的测定
2 原理
种子活组织吸收 2,3,5-三苯基氯化四氮唑(简称四唑,TTC)后,活细胞脱氢酶中的氢
将其还原成一种红色的、稳定的、不会扩散的和不溶于水的三苯基甲潜,据此可依据胚和胚
乳组织的染色反应来区别有生活力(红色)和无生活力(无色)的种子
活组织染色
试样水浸泡四唑染色
死组织不染色
3 试剂
磷酸缓冲溶液:
A: 磷酸二氢钾(KH2PO4)溶于 1000ml 蒸馏水中;
B: 二水磷酸氢二钠(Na2HPO4·2H2O)或 磷酸氢二钠(Na2HPO4)溶于 1000ml
蒸馏水中;
2 份 A 与 3 份 B 混合即成磷酸缓冲溶液.
%(m/V)四唑溶液:1g 四唑盐用 200ml 上述缓冲溶液溶解。
4 仪器设备
恒温箱;
显微镜;
培养皿、镊子、单面刀片;
天平,感量 ;
5 试样制备
水稻种子脱壳后,随机取 400 粒,分四个重复,每个重复为 100 粒;在水中浸泡 18h,
滤除清水,纵切胚和四分之三胚乳;加入 %四唑溶液,复盖试样;在 30℃避光、黑暗条
件下染色 3h;用清水洗净,观察切面。
6 操作步骤
预试验
空白试验
样品测定
判断标准:胚全部染色或胚根顶端 2/3 不染色,而其余部位全部染色为有生活力种子。
种胚全部染成鲜红色,有生活力;