文档介绍：FNCPJZCY0053 茶黄曲霉毒素 B1 测定液相色谱法

F_NCP_JZ_CY_0053
茶—黄曲霉毒素 B1 测定—液相色谱法

1 范围
本方法适用于茶叶中黄曲霉毒素 B1 的测定。
2 原理
样品用三氯甲烷提取,提取液经硅胶柱净化,净化后的提取液用三氟乙酸衍生,用配有
荧光检测器的液相色谱仪测定,外标法定量。
3 试剂
所用试剂,除特殊注明外,均为分析纯,水为重蒸馏水。
三氯甲烷。
正已烷。
苯。
甲醇:紫外光谱级。
乙腈:紫外光谱级。
三氟乙酸。
乙腈-水溶液(1+1)。
三氯甲烷-甲醇溶液(95+5)。
苯-乙腈溶液(98+2)。
黄曲霉毒素 B1 标准品:纯度≥99%。
黄曲霉毒素 B1 标准溶液:准确称取适量的黄曲霉毒素 B1 标准品,以苯-乙腈溶液(98+2)
于棕色容量瓶中,配成浓度为 10µg/mL 标准贮备液。根据需要,再配成适当浓度的标准工作
溶液。
4 仪器设备
高压液相色谱仪,配有荧光检测器。
硅胶小柱:Waters Sep-pak Silica 前处理小柱或相当的硅胶前处理小柱。
振荡器。
旋转蒸发器,配有 100mL 具尾管的圆底烧瓶。
微量注射器。
离心管:5mL 具塞磨口。
粉碎机。
滤膜:有机系用,µm。
微孔滤膜过滤器:有机系用,µm。
5 样品测定
提取
称取试样 (精确到 )置于 100mL 具塞锥形烧瓶中,加入 15mL 三氯甲烷,于振
荡器上提取 30min,然后经垫有玻璃纤维的漏斗过滤。收集滤液于旋转蒸发器的具尾管圆底
烧瓶内,并用三氯甲烷洗涤滤渣,收集滤液至约 20mL。
净化
用旋转蒸发器将上述滤液在 50℃水浴中浓缩至约 1mL,经 µm 滤膜过滤后,注入硅
胶小柱中。用 2~4mL 正已烷洗涤烧瓶后淋洗小柱,弃去流出液。然后用 3~4mL 三氯甲烷-甲
醇溶液以每秒钟 2 滴的流速洗脱,收集洗脱液于离心管中。用氮气缓缓吹干,供衍生用。
衍生
试样
加 200µL 正已烷和 50µL 三氟乙酸于上述离心管中,盖紧磨口塞,超声振荡 1min,静置
10min,打开磨口塞,缓缓通入氮气至干。用乙腈-水溶液(1+1)定容至 ,超声 1min,
用 µm 滤膜过滤,滤液供液相色谱用。
标准工作溶液
取标准工作溶液,用氮气缓缓吹干,按步骤操作。
气相色谱参考条件
a. 色谱柱:NOVAPAKC18,300×(内径);
b. 流动相:甲醇-水(42+58);
c. 荧光检验器:激发波长 375nm,发射波长 425nm。
d. 流速:;
e. 测定温度: