文档介绍：酶联免疫吸附试验检测伤寒O抗体方法的建立
李金泽,郑欣宁,杨芳芳,郑思涵
2015年11月9日
三、ELISA
实验原理
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例,加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接的放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。
竞争法
pering ELISA)可用于测定抗原,也可用于测定抗体。以测定抗原为例, 受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于因相的酶标抗原量与受检抗原的量成反比。操作步骤如下:①将特异性抗体与固相载体联结形成固相抗体,洗涤、封板;②待测管中加受枪标本与一定量酶标抗原的混合溶液,使之与因相抗体反应。如受检标本中无抗原,则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。这样,受捡标本中抗原量越高,则由于这些抗原与固相抗体的结合,竞争性的占去了晦标抗原与固相抗体结合的机会,使酶标抗原与固相抗体的结合量越少。参考管中只加酶标抗原。孵育后,酶体抗原与固相抗体的结合可达最充分的量、洗涤。③加庇物显色。参考管中由于结合的酶标抗原量最多,故颜色最深。。。
酶联免疫吸附试验检测伤寒O抗体
材料与方法