生物化学课件（杨洋）17重组dna技术教学材料.ppt

文档介绍：重组DNA技术
binant DNA Technology
张晓伟
E-mail: ******@bjmu.
北京大学医学部生物化学与分子生物学系
一、克隆体系:目的基因、载体DNA、工具酶、宿主细胞等
1、目的基因(target gene):cDNA或基因组DNA
2、载体(vector):质粒、噬菌体、柯斯质粒载体、病毒和人工染色体等
cDNA (complementary DNA):指体外经反转录合成的,与RNA (常指mRNA)互补的单链DNA,单链cDNA进而合成双链cDNA。
基因组DNA(genomic DNA):代表一个细胞或生物体整套遗传信息的所有DNA序列,称为基因组DNA。
质粒(plasmid):存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子,在细胞中可以独立进行复制并在细胞分裂时恒定地传给子代细胞。
限制性核酸内切酶(restriction endonuclease): 存在于细菌体内,能够识别和切割双链DNA内部特定核苷酸序列的一类核酸酶。
3、工具酶:限制性核酸内切酶、连接酶、DNA聚合酶、逆转录酶、碱性磷酸酶、RNA酶、DNA酶,等
常用的是II类限制性内切酶
许多限制性核酸内切酶II的识别序列属于回文结构
回文结构:DNA的两条链呈旋转对称,即中心轴两侧的碱基序列为互补序列。
patible end):不同限制性内切酶产生的相同粘性末端
DNA聚合酶:大肠杆菌DNA聚合酶I(全酶)、Klenow片段(Klenow 酶)、T4 DNA聚合酶以及Taq酶等
DNA连接酶
T4 连接酶:可用于粘端与平端的连接
4、宿主细胞:大肠杆菌、酵母、动物细胞
质粒的特点:
1、环状DNA,2kb~数百kb。
2、某些质粒可以重组到染色体中复制。
质粒载体
3、质粒的遗传信息可以赋予细胞某些性状(抗药性等) ,这些性状的有无常用于鉴定质粒是否存在于活细胞中。
4、质粒复制分两型——严谨型、松弛型
松弛性质粒,拷贝数多,不受细胞内染色体控制。
质粒载体
严谨型质粒,拷贝数少,复制受染色体控制。
The constructed plasmid pBR322
质粒载体
外源基因插入位点EcoRⅠ
含一个复制起始点(ori)
抗药基因terr和ampr
。
1、克隆载体