文档介绍：食品中苏丹红I的 免疫学快速检测方法研究
fuyunjie1985@
前言
苏丹红I(1-苯基偶氮-2-萘酚),属于苏丹红染料的一种,作为化学合成染料,主要应用于鞋油、化妆品等工业产品及其他着色剂等领域。
苏丹红I在体内代谢,可被还原为初级代谢产物苯***和1-氨基-2-萘酚,这些物质会攻击肝细胞,引起中毒性肝病,也可造成神经系统损害,是一种遗传毒性致癌物。
苏丹红I
前言-苏丹红I检测现状
目前食品中苏丹红I的检测主要辅助仪器( HPLC 、IAS-HPLC )进行检测,而仪器检测方法普遍存在的缺陷在于:
1. 检测仪器昂贵
2. 检测成本高
3. 操作复杂
4. 耗时长
5. 需专业人员操作
6. 不适宜现场抽查及推广应用
免疫学检测技术解决食品中苏丹红I快速检测的问题!
一. 研究内容
苏丹红I多抗
制备及鉴定
研究内容
苏丹红I免疫学检测方法建立
间接
竞争ELISA方法
胶体金免疫层析试纸条法
1. 苏丹红I多克隆抗体的制备
苏丹红I多克隆抗体的纯化及含量测定
苏丹红I多克隆抗体的制备
苏丹红I衍生物-明胶免疫抗原的合成
苏丹红I
多抗
制备
免疫原的制备:
①利用重氮法合成带有羧基的苏丹红I衍生物
②利用混合酸酐法合成苏丹红I-明胶复合物
对氨基苯甲酸
2-萘酚
苏丹红I衍生物
苏丹红I衍生物
明胶
苏丹红I衍生物-明胶
苏丹红I免疫原的制备
首次免疫: mL完全弗氏佐剂+ mL 2 mg/mL免疫原, 于兔背部注射。
2 周后: mL不完全弗氏佐剂+ mL 2 mg/mL免疫原,足掌注射。
每隔10天: ,
加强免疫3次。
最后一次免疫后的7~10天试血。
苏丹红I多抗的制备
选择体重2 kg的雄性新西兰兔,按照常规免疫程序,制备多克隆抗体。整个免疫过程为2~3个月。
多克隆抗体的纯化
辛酸硫酸铵法
亲和层析法
苏丹红I衍生物的合成结果
苏丹红I衍生物红外图谱鉴定
a- 苏丹红I
b- 衍生物
b曲线在1700cm-1处存在较强的吸收峰表明
反应产物的结构上基本连接羰基。
苏丹红I衍生物的色谱分析结果