文档介绍：试剂盒使用说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
本试剂盒仅供研究使用
检测范围: pg/ml-80 pg/ml
最低检测限: pg/ml
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的小鼠胃泌素,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月
预期应用:ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中胃泌素含量。
说明
试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗胃泌素抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗胃泌素抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胃泌素呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
酶联板(Assay plate ): 一块(96孔)。
标准品(Standard): 2瓶(冻干品)。
样品稀释液(Sample Diluent): 1×20ml/瓶。
生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent): 1×10ml/瓶。
辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent): 1×10ml/瓶。
生物素标记抗体(Biotin-antibody): 1×120μl/瓶(1:100)。
辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin): 1×120μl/瓶(1:100)。
底物溶液(TMB Substrate): 1×10ml/瓶。
浓洗涤液(Wash Buffer): 1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
终止液(Stop Solution): 1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
需要而未提供的试剂和器材
标准规格酶标仪
高速离心机
电热恒温培养箱
干净的试管和Eppendof管
系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等
标本的采集及保存
血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000 g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则:
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml