文档介绍：第一节、抗体的制备
一、抗血清的制备
(一)用于免疫的动物
主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等,
抗原来源与动物种属的关系:种属差异越远,免疫原性越强。
动物种类的选择:根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量。
一般制备抗血清,多用家兔和山羊,因其反应良好,能够提供足够数量的血清。
用于免疫的动物应适龄,健壮,无感染性疾患,雄性,
注意饲养,消除个体差异,及免疫过程中的死亡。
家兔中纯种新西兰兔最好,一组三只,兔的体重以2~3kg为宜。
(二)免疫途径
如肌肉内、皮内、皮下、静脉内、腹腔内、淋巴结内注射等,
一般用皮下或背部多点皮内注射,。
途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性,如激素、酶、毒素等生物学活性抗原,一般不宜采用静脉注射。
(三)佐剂
注射抗原时加入的能增强抗原的抗原性、刺激机体产生较强免疫反应的物质,称为免疫佐剂。
佐剂的作用:
延长抗原体内存留时间
增加抗原刺激作用
刺激免疫活性细胞增多
促进T细胞与B细胞互作。
不完全福氏佐剂:羊毛脂:石腊油=1: 5,视需要可调整为1:2~9(V/V),
福氏完全佐剂:在每毫升不完全佐剂加入1~20mg卡介苗。
配制方法:
按比例将羊毛脂与石腊油置容器内,用超声波混匀,高压灭菌,置4℃下保存。
免疫前取等容积佐剂与免疫原溶液混合,振荡器混匀成乳状,也可研磨均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液,加完后再继续研磨成乳剂,至滴于冰水上5~10min内完全不扩散为止。
为避免损失抗原,亦可用一注射器装抗原液,另一注射器装佐剂,二者以聚乙烯塑料管连接,然后二者来回反复抽吸,约数十分钟后即完全乳化。
(四)免疫方法
抗原剂量:首次为300~500μg,加强免疫约为首次的1/4左右。
每2~3周加强免疫一次。加强免疫时用不完全佐剂,
,加强免疫时不用。
第2次加强免疫后2周,耳缘静脉取血2~3mL,制血清,测抗体效价。
如未达到预期效价,需再进行加强免疫,直到满意时为止。
抗体效价达到预期水平时,即可放血制抗血清。