文档介绍：·406· Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, April 2010, Vol. 24,
大鼠胰岛分离纯化技术的改良及活性研究
徐艳艳1 傅红兴1 王浙明1 周贤用1 许宇璐1 汪大望2 薛圣留2 李校堃1
【摘要】目的胰岛的纯度和活性对胰岛移植治疗糖尿病的疗效有很大影响。探讨一种大鼠胰岛分离纯化
的新方法,以获得高纯度、高产量、活性好的胰岛。方法选取健康成年雄性 SD 大鼠 10 只,体重 250 ~ 300 g,逆行胆
总管灌注Ⅴ型胶原酶溶液,38℃水浴消化约 15 min 后,采用两种方法纯化胰岛细胞:A 组采用 Ficoll 400 不连续密度梯
度液,B 组采用 Ficoll-Paque™ PLUS 溶液。行双硫腙(dithizone,DTZ)染色鉴定胰岛并计算胰岛当量(islet equivalent
quantity,IEQ)、胰岛纯度,锥虫蓝染色检测胰岛活性。取 B 组胰岛用海藻酸钠- 聚左赖氨酸- 海藻酸钠(alginate/poly-L-
lysine/alginate,APA)包裹制备胰岛微囊,体外静止葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测微囊化和未微囊化胰岛的生物学活
性。结 果 DTZ 染色示胰岛呈猩红色,有圆形、椭圆形和不规则形,胰岛边缘清晰,大部分直径为 50 ~ 300 μm。A、B
组 IEQ 值分别为 ± 和 ± ,比较差异有统计学意义(P < )。A、B 组胰岛纯度分别为 % ±
% 和 % ± %,差异无统计学意义(P > )。A、B 组胰岛活率分别为 % ± % 和 % ± %,
差异有统计学意义(P < )。胰岛 APA 微囊囊形呈完整圆形,大小均匀,微囊直径为 ~ mm,每个微囊中包裹
1 ~ 3  个胰岛。葡萄糖刺激释放胰岛素实验显示,未微囊化胰岛和微囊化胰岛在低糖下的胰岛素分泌浓度分别为( ±
) ng/ mL 和( ± )ng/mL,高糖下分别为( ± )ng/mL 和( ± )ng/mL,高糖刺激下胰岛素释放
量为低糖刺激的 2 倍多,差异有统计学意义(P < );两组的刺激指数分别为 ± 和 ± ,差异无统计学
意义(P > )。结论 Ficoll-Paque™ PLUS 溶液作为纯化液分离纯化胰岛的方法具有操作简便、胰岛产量高、纯度高
等优点,获得的胰岛经微囊化或未微囊化体外培养均有良好活性。
【关键词】胰岛分离纯化微囊化改良方法大鼠
中图分类号: Q813 文献标志码:A
IMPROVED METHODS OF ISOLATION AND PURIFICATION OF RAT ISLETS AND ITS VIABILITY RESEARCH/XU
Yanyan1, FU Hongxing1,