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黄芪甲苷对脂多糖刺激单核细胞的保护作用及其机制研究·论著·冀晓俊,李昂,段美丽,张淑文严重脓毒症的抗炎治疗是临床难题。已有研究认为黄芪多糖可发挥部分抗炎作用Ⅱ1究翁庾榍期研究已证实多种黄芪分离物均有不同程度的抗炎作用,其中以黄芪作用甲苷尤甚。本研究旨在观察黄芪甲苷对脂多糖盏嫉南赴蛲鍪欠窬哂幸制作用。牧嫌敕椒实验动物与试剂:芰湫坌訵笫螅重骄鹤灾泄窖Э学院实验动物研究所镄砜芍ず牛篠籖嘌美国,胎牛血清本┰:嗍ヂ砉,甤築北京碧云天生物技术研究所灰炝蚯杷嵊ü馑兀红蛋白标记的膜联蛋白狥疨染色和赫斯特荧光染料荧光单染试剂盒购自武汉博士德公司。药物制备:黄芪甲苷由中国科学院兰州化学物理研究所提纯分离,,再溶于培养基中,过滤除菌,姹4姹赣谩J褂檬庇帽侗认∈生垦主堕垦篁金叁墼塑查;旦箜鲞筮苈堕』锎缘┘崧韭垦望筆塑璺::锥家娇拼笱Ц绞舯本┯岩暌皆褐刂⒁窖Э疲本观察黄芪甲苷对脂多糖碳さ牡ズ讼赴芊衿鸨;ぷ饔眉捌浠啤7椒刺激体外培养的大鼠单核细胞,首先观察盏嫉ズ讼赴⑸蛲龅淖罴雅ǘ龋俳ɑ栖渭总瞻磁ǘ忍荻直鹞、弘痬加入细胞培养上清液中,测定其最大无毒浓度及半数中毒浓度弧;并以不同浓度黄芪甲苷干预,测定黄芪甲苷的半数有效浓度!和%有效浓度#。采用异硫***酸荧光紊/藻红蛋白标记的膜联蛋白—/旧ê秃账固赜ü馊玖ü单染,流式细胞仪观察黄芪甲苷对孪赴蛲龅谋;ぷ饔谩=峁鸏在单核细胞培养上清液中的浓/时可以诱导细胞凋亡,;栖渭总盏腡雊/时,N法测出,其。。和。直鹞/;用雊/黄芪甲苷进行干预后,培养的细胞贴壁良好,核浓缩、核着边等现象显著减少,凋亡率明显下降.=崧刍栖渭总斩訪刺激后的单核细胞有保护作用,其机制与抑制细胞凋亡有关。【关键词】脂多糖;黄芪甲苷ズ讼赴坏蛲中图分类号:.籕猯瑉%.瓹·【摘要】目的以度为/和文献标识码:痡..—...—甃,,【】甅,//,.,///,.士%.//,/;基金项目:国家知识产权局专利作者简介:冀晓俊,男鹤,山西省人,医学博士,主治医师。琂珼恍璭.,,甊...簍,,甌猧
万方数据
掣方法分别稀释为碳さズ讼赴P徒⑴鉺悍掷氩⑴嘌外周血单核细胞,以锥虫蓝染色检查细胞存活率细胞总数一蓝色细胞数赴苁%O胞贴壁后灰海陨硌嗡芙釲,过滤除菌;分别以/梯度浓度加入细胞培养上清液,通过流式细胞仪检测缘ズ细胞的影响。黄芪甲苷的药物毒性实验:测定黄芪甲苷最大无毒浓度及半数中毒浓度!UE养单核细胞,待细胞融合达%时加入不同浓度黄芪甲苷,同时设空白对照组,作用螅尤胨募基偶氮唑盐谢钕赴旧ǎ副暌羌觳飧组波长处的细胞吸光度担谰軩软件计算黄芪甲苷对单核细胞的毒性。黄芪甲苷的药效学实验:测定黄芪甲苷半数有效浓度!和%有效浓度!‘引。在孔板中培养单核细胞,分为空白对照组、碳ぷ椤⒁效测定组煌ǘ然栖渭总。当碳组细胞接近全部死亡时,加入活细胞染色,利用酶标仪检测细胞担谰軩软件计算黄芪甲苷药效学指标。细胞凋亡实验:用流式细胞仪分析细胞凋亡率=ǜ髯橄赴嘌螅邢⒁掖脊定;加入窤,℃下孵育;暗染昧魇较赴墙械蛲龇治觥狥疨旧ǚ椒ǎ航ǖズ讼胞分组培养至显微镜下有明显差异后,弃上清液,用冷磷酸盐缓冲液次;依次加入冲液和狥芄馐椅路从加入弘;用激光扫描共聚焦显微镜检测并照相。荧光单染观察染色质凝聚:细胞消化后以逑次,加入张ǘ/娣跸淙旧;涂片,荧光显微镜下观察