实验三超氧化物歧化酶(SOD)提取及活性测定.ppt

文档介绍：生物技术综合实验实验三超氧化物歧化酶(SOD)的提取及活性测定一、目的和要求通过植物材料(玉米)超氧化物歧化酶(SOD)的提取及活性测定,掌握硫酸铵盐析沉淀蛋白质及超滤浓缩蛋白质的方法和原理。二、实验原理超氧化物歧化酶(SOD)广泛存在于植物体内,它是一种重要的自由基清除剂,对生物体有多种保护作用。超滤是一种蛋白质浓缩方法,只要选择适当的滤膜可将玉米浆中的SOD与其他小分子杂蛋白、可溶性糖等分离。三、、(),500mL2、氯仿-乙醇混合液:氯仿:无水乙醇=3:53、丙酮:用前需预冷至4-10℃4、()5、、冷冻高速离心机、可见分光光度计、研钵、玻棒、烧杯、量筒,等。四、操作步骤、组织细胞破碎:称取5g大蒜蒜瓣或玉米种子,置于研钵中研磨。2、SOD的提取:破碎后的组织中加入2-(),继续研磨20min,使SOD充分溶解到缓冲液中,然后在5000rpm下离心15min,取上清液。3、除杂蛋白:-乙醇混合液搅拌15min,5000rpm离心15min,得到的上清液为粗酶液。4、SOD的沉淀分离:粗酶液中加入等体积的冷丙酮,搅拌15min,5000rpm离心15min,得SOD沉淀。()中,于55-60℃热处理15min,得到SOD酶液。(mL)—样品液—,在30℃水浴中预热5min,=酶液总体积X稀释倍数/抑制50%的酶液量X样品重五、本实验教学内容的重点和难点重点:粗提液的获得玉米SOD的提取难点:提取条件的控制