文档介绍：实验不溶性膳食纤维提取(4学时)实验大蒜SOD的制备工艺(4学时)一、实验目的1、学习超氧化物歧化酶的提取与分离方法;2、熟练掌握操作过程中的操作要点,并能应用到实际生产中。二、实验原理超氧化物歧化酶(SOD)是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它可催化超氧负离子(O2-)进行歧化反应,生成氧和过氧化氢:2O2-+H2==O2+H2O2。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD,通过组织或细胞破碎后,。由于SOD不溶于丙酮,可用丙酮将其沉淀析出。三、:电子天平、研磨器、高速离心机、水浴锅、移液枪、50ml试管、分光光度计等。:(1)磷酸缓冲液:,;(2)氯仿-乙醇混合溶剂: 氯仿:无水乙醇=3:5(V/V);(3)丙酮:用前冷却至4-10℃;(4)碳酸盐缓冲液:,;(5)EDTA溶液:;(6)肾上腺素液:2mmol/L;(7)新鲜蒜瓣;(8)大蒜细胞,通过细胞培养技术获得。四、,置于研磨器中研磨,使组织或细胞破碎。,加入2~3(20-30ml),,继续研磨搅拌20min,使SOD充分溶解到缓冲液中,然后用离心机在5000rpm,离心15min,弃沉淀,得提取液。-乙醇混合溶剂搅拌15min,5000rpm离心15min,去杂蛋白沉淀,得粗酶液。(自己配100ml),搅拌15min,5000rpm离心15min,得SOD沉淀。,,于55-60℃热15min,离心弃沉淀,得到SOD酶液。将上述提取液、粗酶液和酶液分别取样,测定各自的SOD活力。,按下表分别加进各种试剂和样品液。(ml) -样品液---,充分摇匀并在30℃水浴中预热5min至恒温。加入肾上腺素(空白管不加),继续保温反应2min,然后立即测定各管在480nm处的光密度。对照管与样品管的光密度值分别为A和B。在上述条件下,SOD抑制肾上腺素自氧化的50%所需的酶量定义为一个酶活力单位。即: 酶活力(单位)=2·(A-B)·N/A式中N――样品稀释倍数; 2――抑制肾上腺素自氧化50%的换算系数(100%/50%)。若以每毫升样品液的单位数表示,则按下式计算: 酶活力单位/ml=2·(A-B)·N/A·V/V1=26·(A-B)·N/A式中V――反应液体积(); V1――样品液体积()。最后,根据提取液、粗酶液和酶液的酶活力和体积,计算纯化回收率。五、注意事项严格控制好各项操作参数,以免酶活力变性失活。实验茶多酚的制备与检验(4学时)一、实验目的使学生体验从茶叶中提取茶多酚的过程,学习沉淀萃取法的原理与工艺流程。二、实验原理茶叶茶多酚易溶于热水中,利用茶多酚能与Ca、Hg等金属离子产生络合沉淀的现象将茶多酚从提取液中分离离心出来。在用靛红作指示剂的情况下,样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚类物质。,计算出茶多酚的含量。三、实验用品1、仪器和小型用具:加热回流装置、500ml烧杯、布氏漏斗+减压过滤装置、滤纸、滴管、长搅拌棒、pH试纸(满足pH=4、pH=7两个范围)、天平、药勺、水浴锅、三角瓶、铁架台+滴定管。2、材料:茶叶(市售绿茶叶末)共350g3、试剂:乙醇(95%食用酒精)、3mol/L氯化钙、3mol/L氯化锌、乙酸乙酯四、实验步骤(一)提取工艺流程原料→粗粉碎→热水浸提→加盐→调pH→离心→弃上清液→稀酸转溶→乙酸乙酯萃取→浓缩干燥1、原料粉碎2、热水浸提:-25g,与水按照质量比1:10在100℃热水中浸泡,边加热边搅拌。3、加盐:在浸提液中加入3mol/L氯化钙或3mol/L氯化锌。若无沉淀产生加入一定量的氢氧化钠调节pH。4、离心:用离心机离心收集滤渣或沉淀。5、稀酸转溶:加入稀盐酸至沉淀溶解。取部分样品稀释定容进行检测。6、转溶水液加乙酸乙酯萃取。7、浓缩干燥:真空干燥。(二)热水浸提粗品检测取200mL蒸馏水放在有柄瓷皿中,%靛红溶液5mL,再加入供试液5mL。开动搅拌器