文档介绍：脱氧核糖核酸(��)的制备
王尔中
(中国科学院动物研究所)
在实验生物学的研究中,��的制备已缓冲液中。
成为一种常用的方法。根据实验材料和研究目(二) 非离子性乳化荆溶胞法[��
的不同,所用的制备方法也不同。本文主要介此方法是用轻度溶胞法,可以使细菌细胞
绍质粒��和其它(动物组织、细菌)��的染色体��仍然与细胞膜结合在一起,这
常用的制备方法。样就能在低速离心中将染色体��与质粒
��分开。
一、质粒��的制备非离子性乳化剂多氧乙烯十六烷醚(即��
质拉��)是共价闭合环状的超螺旋��,可以用来分离质粒��。通常所使用的
��。它的碱基比例与染色体��不同,质蔗糖缓冲液和溶菌酶制备的细菌球形体,在脱
粒��分子量小,而染色体��分子量大。氧胆酸盐(��)和��存在的情况下,加
根据这些特点,研究人员采用一些实验技术进人��溶胞,在低速离心中绝大部分(��外)
行提取纯化。常用的方法有以下几种。的染色体��会沉降下来,而质粒��保
(一) ��改良法持在上清液中。因为脱氧胆酸盐可以分解细胞
此方法可以用来提取质粒��或分子量膜的脂蛋白或脂多糖,因此质粒��可以与
小的��(如噬菌体、病毒或线粒体��细胞膜分离。这一方法广泛应用于分离质粒
将细菌培养到��细胞/毫升浓度(��与染色体��
��‘处�· �约为��离心��(三) 质粒��的提纯方法
分钟收集菌体。然后重新悬浮于�倍体积的��一般地说,上述两种方法分离的质粒��
��缓冲液中。都比较粗放,需进一步纯化。常用的纯化方法
轻轻摇动混合,加��毫克/毫升的链霉素蛋白酶有以下三种。
�,使最终浓度到��微克/毫升。然后再加��务�.两相法[��
的��,使最终浓度达�多。在��℃下保温��分此方法是继冷酚法抽提之后,用酒精沉淀
钟,然后慢慢加人��***化钠,使最终浓度为出��(还包括各种��。它是一种专门
��(此步骤必须边加边摇),混合均匀,再于��提取闭合环状双链��的快速方法之一。
放置过夜。过夜后,在��离心��分在供试��悬液中加人少量��
钟,取上清液,加入等体积的三***甲烷一异戊醇��缓冲液。在��℃加
��混合液,再加入等体积��的苯酚,��热�分钟后,迅速放入干冰一酒精溶液中冷却。
下搅拌��分钟,再置于��离心��分然后加��,倍体积的葡聚糖��多��
钟。吸出水相层,加二倍体积冷乙醇��倍体积的聚乙二醇��多��
于一��℃放置过夜。过夜后,在一��)和十分之一体积的��磷酸钠缓冲液��
离心��分钟。将沉淀溶于少量��的��温度保持在��。然后再加水,使体积成
��***化钠、��为原体积的,倍。充分混匀,在�℃下低速离
��