第三章 核酸的分离与检测.ppt

文档介绍：icEngineeringByNieguangjunE-mail:@从哪儿提取(Where)?怎么提取(How)?提到什么程度(What)?会出现什么问题(Questions)?如何解决(Solution)?主要内容核酸提取的原则和基本要求PrincipleandstepsPrinciple保持核酸的完整性;提高核酸的质量(纯度和浓度)。Requirementsforpurification不存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;其他事物大分子(Pr、sugarandlipid)其他核酸污染核酸提取的一般过程PrincipleandstepsSteps样品准备(取材)破细胞(物理法、化学法、酶法);除杂质(蛋白质、脂类、糖类和不需要的核酸);-、,并去除杂质 -方法机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法;化学试剂法:用SDS或CTAB处理细胞; 酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。破碎细胞-来源动物:小牛胸腺۰动物肝脏、血液和肌肉组织等۰鱼类精子;植物:种子的胚中都含有丰富的DNA。微生物:谷氨酸菌体含7%~10%,面包酵母含4%,啤酒酵母含6%,大肠肝菌含9%~10%(培养过夜)。Note:从各种材料中提取DNA方法不同,分离提取的难易程度也不同。对于低等生物。如从病毒中提取DNA比较容易,多数病毒DNA分子量较小,提取时易保持其结构完整性。从高等动植物中提取DNA难度大一些。因分子量较大,易被机械张力剪断。破碎细胞(来源-方法)微生物:溶菌酶、SDS裂解。高等植物:捣碎器破碎、液氮研磨。酶法:蛋白酶,如胰蛋白酶,冰冻法:反复冻融或液氮冻后组织捣碎。动物:液氮处理后用匀浆器破碎。细胞器DNA:首先纯化细胞器。以上处理时均要同时加入核酸酶抑制剂