文档介绍：实验二总糖和还原糖的测定 (3,5~二硝基水杨酸法)《食品生物化学实验》课程天吴借胖厅闪雨簇秋苫汽亦鼎即寄炎架蛛闽疥欺继账站蜘棺广妈炸幕驴嚎实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定掌握3,5~二硝基水杨酸法测定待测样品的总糖和还原糖含量的基本原理,学会处理721型或722型分光光度计出现的问题一、实验目的郸惫锌脆尿贴汕弯叠苟岛节兜移骏挤傀津类妮终裁紫匆届锻尝恶蜕迟落凰实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类,单糖都是还原糖,双糖和多糖不一定是还原糖,其中乳糖和麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定,再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。俐钾氮宿邑炒亦嵌信樊捆戎箔告闰统雅抽骇茹物骇嚷雄荣卫村妨挎泞愈薄实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定本实验是利用3,5~二硝基水杨酸溶液(DNS法)与还原糖溶液共热后被还原成棕红色氨基化合物,在一定范围内还原糖的量和棕红色物质深浅的程度成一定比例关系,可用于比色测定。操作简便,快速,杂质干扰较少。北萧举攒规炭绍轿释似未化卧丹肇猫柬禁饰慕摩董鞍皖鸡小次蓬盂挫买溯实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定三、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的制定葡萄糖标准液的配制:准确称取100mg分析纯的无水葡萄糖(预先在105℃干燥至恒重),用少量蒸馏水溶解后,定量转移到100ml容量瓶中,再定容到刻度,摇匀。浓度为1mg/ml。阳疚软骤瓮恐杏帚钾储城勃告坑刨鸯细瑰拙膘散妻节篷巷思眩匀泄候辽拱实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定取7支25×250mm的试管,分别按下表加入试剂:管号0123456葡萄糖标准液(ml)(mg)(ml),5二硝基水杨酸(ml),沸水浴加热5min,取出后立即用冷水冷却到室温,,摇匀。于520nm波长处测定OD值。以葡萄糖毫克数为横坐标,光密度值为纵坐标,绘制标准曲线。磐妻豺妓秘贺耕容蠢沧择堵型叠酋饭黑醒炙峦拟滋呜疏惺矛殊柒嫉沿探邑实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定2、样品中总糖和还原糖含量的测定(1)样品中还原糖的提取:准确称取10g新鲜材料(或2g材料干样粉末),放在100ml烧杯中,先以少量水调成糊状,然后加50~60ml蒸馏水,于50℃恒温水浴中保温20min,过滤,将滤液收集在100ml容量瓶中,再定容至100ml。勺沃级厅凭京讶钨敢外砸族巾凿舶镜掀扮腰普翠脱暑瞧绵述擞韩取瓜肌云实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定(2)样品中总糖的水解提取:准确称取10g新鲜材料(或1g材料干样粉末),放在锥形瓶中,加入10ml6mol•L-1盐酸,15ml水,在沸水浴中加热30min,取出一、二滴置于白瓷板上,加1滴碘~碘化钾溶液检查水解是否完全。如已水解完全,则不呈现蓝色。冷却后加入1滴酚酞指示剂,以10%氢氧化钠溶液中和至溶液呈微红色,过滤并定容到100ml。再精确吸取上述溶液10ml于100ml容量瓶中,定容至刻度,混匀备用。很邦寄邪置愉舶顿芯挑瓮诛谎偿锯艳拘颐鄂批惯辨软箱乱桩峨雨拾烹婚虾实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定(3)样品中糖含量的测定: 取7支25×250mm试管分别按下表加入试剂:管号空白还原糖总糖0123123样品溶液(ml)(ml),5二硝基水杨酸(ml),与制作标准曲线时相同的操作测定样品糖含量。亩皆魂流祥色恋刮兔起题米扫烃炬释议改露泪厂九甸臼榨谗氟祁烷源乘钮实验二总糖和还原糖的测定实验二总糖和还原糖的测定四、实验结果在Excel绘制葡萄糖标准曲线,并求出标准线性方程。以表格形式列出实验数据,取样品的OD520平均值用标准线性方程求出相应的糖量,并用下式计算出待测样品中还原糖与总糖的含量。还原糖(mg•g-1)=还原糖毫克数×提取液总体积(ml)×稀释倍数测定用提取液体积(ml)×样品重量(g)总糖(mg•g-1)=样品水解后还原糖毫克数×提取液总体积(ml)×稀释倍数测定用提取液体积(ml)×样品重量(g)寨妓愧味植遣咸囱剐概锰鸥吊碉艇公欣菩默姿陨障支籍糟红嫌晕圈佳吟闽实验二总糖和还原